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原代細胞生長狀態(tài)

時間:2018/2/8閱讀:202
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1.首先,觀察原代細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。

2.用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3.仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4.靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

5.貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。

6.懸浮細胞:將原代細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
    進口、國產(chǎn)        25克    高純,PC=90%
    進口、國產(chǎn)        100克    
大豆氫化卵磷脂    進口、國產(chǎn)    HSPC    1公斤    BR,PC=95%
蛋黃軟磷脂    進口、國產(chǎn)    Lecithin from egg yolk    10克    BR
酵母氮源-無氨基酸    進口、國產(chǎn)    YNB    100g    BR
    進口、國產(chǎn)        1公斤    
    進口、國產(chǎn)        10公斤    
白明膠    進口、國產(chǎn)    Gelatin    500克    CP
蛋白胨    進口、國產(chǎn)    Peptone    250克    BR
胰化蛋白胨    進口、國產(chǎn)    Tryptone    250克    BR
    進口、國產(chǎn)        500克    
示蛋白胨    進口、國產(chǎn)    Tryptose    250克    BR
    進口、國產(chǎn)        500克    
原代細胞

 

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