天根試劑盒-DNA純化膠回收試劑盒-DP214
產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用緩沖體系和離心吸附柱，既可從TAE 或TBE 瓊脂糖凝膠中回收DNA 片段，又可用于直接純化PCR 產(chǎn)物，能夠滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。溶膠液PC 中含有pH 指示劑，可根據(jù)顏色來判斷溶膠狀態(tài)。使用本產(chǎn)品可回收100 bp- 8 kb 大小的DNA 片段，回收率 可達(dá)80%。使用本試劑盒回收的DNA 可直接用于連接、轉(zhuǎn)化、酶切、測(cè)序等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
■ 兼容性強(qiáng)：既可用作DNA 產(chǎn)物直接純化，又可用作DNA 凝膠回收。
■ 操作簡便、可回收膠體積大：可按照膠塊與溶膠液等比進(jìn)行溶膠。
■ 穩(wěn)定、可靠：配有指示劑，可直觀判斷影響DNA 吸附的pH 值，又可判斷DNA 與膜是否充分結(jié)合，提高回收效率。
產(chǎn)品組成：
DP214-02 (50 preps)：
溶液PC(Buffer PC) 25 ml
平衡液BL(Buffer BL) 30 ml
漂洗液PW(Buffer PW) 15 ml
洗脫緩沖液EB(Buffer EB) 15 ml
吸附柱CB2(Spin Columns CB2)50個(gè) 50個(gè) 5 個(gè)
收集管(2 ml)(Collection Tubes (2 ml)) 切膠器(Gel Cutter) 。
DP214-03 (200preps)：
溶液PC(Buffer PC) 100 ml
平衡液BL(Buffer BL) 120 ml
漂洗液PW(Buffer PW) 50 ml
洗脫緩沖液EB(Buffer EB) 30 ml
吸附柱CB2(Spin Columns CB2) 200個(gè) 200個(gè) 20個(gè)
收集管(2 ml)(Collection Tubes (2 ml)) 切膠器(Gel Cutter) 。
儲(chǔ) 存 條 件
該試劑盒所有組分置于室溫(15-30℃)干燥條件下，可保存12個(gè)月。若溶液產(chǎn)生沉 淀，使用前可在37℃水浴中預(yù)熱10min以溶解沉淀，不影響效果。
產(chǎn) 品 簡 介
本試劑盒采用的離心吸附柱，既能從TAE或TBE瓊脂糖凝膠中回收DNA片段，又 能用于直接純化PCR產(chǎn)物，滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。溶液PC中含有pH指示劑，可根據(jù)顏色來 判斷溶膠或PCR產(chǎn)物回收是否達(dá)到狀態(tài)。使用本產(chǎn)品可回收100 bp-8 kb大小的DNA 片段，回收率可達(dá)80%,大于8 kb的DNA片段純化建議使用我公司的瓊脂糖凝膠回收試劑 盒DP208/209或DNA產(chǎn)物純化試劑盒DP203/204。每個(gè)離心吸附柱每次可吸附的DNA量為 10 μg。
使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、文庫篩選、 連接和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)。
注 意 事 項(xiàng) 請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。
1. 平衡液BL的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩(wěn)定性，消除高溫 /潮濕或其他不良環(huán)境因素對(duì)吸附柱造成的影響。使用前請(qǐng)先檢查平衡液BL是否出現(xiàn)渾 濁，如有混濁現(xiàn)象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。
2. 溶液PC含有pH指示劑，為黃色，指示pH≤7.5。
天根試劑盒-DNA純化膠回收試劑盒-DP214操 作 步 驟
使用前請(qǐng)先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。
一 、從 瓊 脂 糖 凝 膠 中 回 收 D N A 片 段
1. 柱平衡步驟：向吸附柱CB2中( 吸附柱放入收集管中) 加入500μl平衡液BL,12 .000 rpm (~13.400×g )離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 （請(qǐng) 使 用 當(dāng)天處理過的柱子)
2. 將單 一 的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下 l盡量切除多余部分) 放入干凈的離心管 中，稱取重量。
注意：使用切膠器(OSE-GC)切膠時(shí)，切膠器口對(duì)準(zhǔn)瓊脂糖凝膠中
的DNA條帶下壓切割。切膠完成后，推動(dòng)中心桿，將膠塊推入干凈
的離心管中。根據(jù)凝膠膠孔寬度可進(jìn)行單次和連續(xù)切割。
3. 向膠塊中加入等倍體積溶液PC(如果凝膠重為0.1 g,其體積可視為100 μl,則加入100 μl PC溶液。使用切膠器切割1%的瓊脂糖凝膠，單塊重量約為0.06 g,實(shí)際膠塊重量與凝膠 濃度及厚度相關(guān)),50℃水浴放置10 min左右，其間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管，以確 保膠塊充分溶解。 ( 若膠塊的體積過大，可事先將膠塊切成碎塊)
注意：對(duì)于回收<150 bp的小片段可將溶液PC的體積增加到3倍以提高回收率；膠塊 溶解后將溶液溫度降至室溫再上柱，因?yàn)槲街谑覝貢r(shí)結(jié)合DNA的能力較強(qiáng)。凝 膠融解后應(yīng)呈現(xiàn)黃色，即可進(jìn)行后續(xù)操作。如果膠融解后溶液的顏色為桔紅色 或紫色，請(qǐng)使用10 μl 3M乙酸鈉(pH 5.0)將溶液的顏色調(diào)為黃色后再進(jìn)行后續(xù)操作。
(溶液PC中含有pH指示劑，當(dāng)pH≤7.5時(shí)溶液的顏色為黃色，此時(shí)DNA才能夠有效的與 膜結(jié)合，當(dāng)pH值偏高時(shí)溶液的顏色變?yōu)榻奂t色和紫色，需要進(jìn)行調(diào)整。)
4. 將上一 步所得溶液加入一個(gè)吸附柱CB2中( 吸附柱放入收集管中) ,12,000 rpm(~13,400×g)離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB2放入收集管中。
5. 向吸附柱CB2中加入600 μl漂洗液PW(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇) ,12.000 rpm (~13,400×g)離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB2放入收集管中。
注意：如果回收的DNA是用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)，例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測(cè)序，建議PW 加入后靜置2-5 min再離心。
6. 重復(fù)操作步驟5
7. 將吸附柱CB2放入收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,盡量除去漂洗液。將 吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，晾干。
注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切、PCR等)實(shí)驗(yàn)。
8. 將吸附柱CB2放入一個(gè)干凈離心管中， 向吸附膜中間位置懸空滴加適量) 的洗脫緩沖液 EB, (如果回收的目的片段>4 kb,則洗脫緩沖液EB應(yīng)置于65-70℃水浴預(yù)熱),室溫放 置2 min 。12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,收集DNA溶液。
注意：洗脫液的體積不應(yīng)少于30 ,體積過少會(huì)影響回收的效率。洗脫 液的pH值對(duì)于 洗脫效率有較大影響。若后續(xù)做測(cè)序，需使用ddH2O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-8.5 范圍內(nèi)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。為
1 了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置2 min, 12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,將DNA溶液收集到離心管中。
二 、 從 P C R 反 應(yīng) 液 或 酶 切 反 應(yīng) 液 中 回 收 D N A
1. 柱平衡步驟：向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中)加入500 μl的平衡液BL,12,000 rpm (~13,400×g )離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。(請(qǐng)使用 當(dāng)天處理過的柱子)
2. 估計(jì)PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液的體積，向其中加入等倍體積溶液PC,充分混勻(無需去 除石蠟油或礦物油)。
注意：對(duì)于回收<150 bp的小片段可將溶液PC的體積增加到3倍以提高回收率；溶液混勻 后應(yīng)呈現(xiàn)黃色，即可進(jìn)行后續(xù)操作。如果溶液的顏色為桔紅色或紫色，請(qǐng)使用10 μl 3M乙 酸鈉(pH 5.0)將溶液的顏色調(diào)為黃色后再進(jìn)行后續(xù)操作。
3. 將上 一 步所得溶液加入 一 個(gè)吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中),室溫放2 min, 12,000 rpm(~13,400×g)離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放入收集管中。
注意：吸附柱容積為800 μl,若樣品體積大于800p可分批加入。
4. 向吸附柱CB2中加入600 ul漂洗液PW (使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇) ,12.000 rpm (~13,400×g)離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB2放入收集管中。
注意：如果純化的DNA是用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)，例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測(cè)序，建議PW 加入后靜置2-5 min再離心。
5. 重復(fù)操作步驟4.
6. 將吸附柱CB2放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,盡量除去漂洗液。將 吸附柱CB2置于室溫放置數(shù)分鐘，地晾干。
注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切、PCR等)實(shí)驗(yàn)。
7. 將吸附柱CB2放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量的洗脫緩沖液
EB,(如果回收的目的片段>4 kb,則洗脫緩沖液EB應(yīng)置于65-70℃水浴預(yù)熱),室溫放
置2 min 。12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min收集DNA溶液。
注意：洗脫液的體積不應(yīng)少于30 μl,體積過少會(huì)影響回收的效率。洗脫液的pH值對(duì)于 洗脫效率有較大影響。若后續(xù)做測(cè)序，需使用ddH?O做洗脫液，并保證其pH值在7.0-
8.5范圍內(nèi)，且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。為了提高DNA的回收量，可將 離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)離 心2 min,將DNA溶液收集到離心管中。
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