天根 CB104-02 -0感受態(tài)細胞介紹

產(chǎn)品簡介:

天根生化 TIANGEN公司生產(chǎn)的0感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌 0菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,可用于DNA的化學轉化。使用 pUC19質粒檢測,轉化效率可達108 ,-70℃保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。

每支感受態(tài)可以酌情分裝使用,降低了實驗的成本。質量穩(wěn)定,使用方便,。

產(chǎn)品特點:

0菌株轉化效率高達108 以上。適用于高效的DNA克隆和質粒擴增。能保證高拷貝質粒的穩(wěn)定復制。

基因型:

• F- mcrA △(mrr-hsd RMS-mcr BC)
• φ80lacZ△ M15 △lac X74 recA1
• ara△139  △(ara-leu) 7697 galU
• galK rpsL (Strr) endA1 nupG

儲存條件:

-70℃凍存

天根 CB104-02 -0感受態(tài)細胞 操作方法：（以下各步驟均為無菌操作）

1，將感受態(tài)細胞置于冰上融化，以下實驗以100ul感受態(tài)細胞為例。

2、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，冰浴放置30分鐘。

3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速轉移到冰浴中放置2-3分鐘，注意不要搖動離心管。

4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養(yǎng)基，37℃ 180rpm振蕩培養(yǎng)1小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5、取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調整，如轉化的DNA總量較多，可取100ul左右的轉化產(chǎn)物涂板；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200-300ul的轉化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

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注意事項：

1、感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。

2、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3、轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。

4、轉化率的計算：轉化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉化，將損失降到。

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