光吸收酶標(biāo)儀結(jié)合了紫外可見光分光光度計(jì)及微孔板讀板機(jī)功能于一體，為眾多檢測(cè)如 ELISA、核酸和蛋白定量以及微生物生長(zhǎng)提供了多重選擇且更加便利。
 

　　一、測(cè)定波長(zhǎng)
 

　　目前國(guó)內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP)，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在H?O?溶液的存在下，經(jīng)HRP作用，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時(shí)，DAB在450nm波長(zhǎng)處有吸收，當(dāng)pH值降為L(zhǎng)0時(shí)，吸收波長(zhǎng)移至492nm,同時(shí)摩爾消光系數(shù)變大，顯色加深，因而常用強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長(zhǎng)450nm處有消光系數(shù)，如果HRP量少，H:O:和TMB過量時(shí)，則形成藍(lán)色的陽離子根。降低pH,即可使藍(lán)色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此，450nm和492nm兩個(gè)波長(zhǎng)是目前ELISA測(cè)定常用的。酶標(biāo)儀有單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)檢測(cè)功能有時(shí)使用者不知在什么情況下使用單或雙波長(zhǎng)檢測(cè)。所謂的“單波長(zhǎng)”就是使用一種對(duì)顯色具吸收的波長(zhǎng)即450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定；而“雙波長(zhǎng)”則除了用對(duì)顯色具吸收的波長(zhǎng)即450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定外，同時(shí)用對(duì)特異顯色不敏感的波長(zhǎng)如630nm進(jìn)行測(cè)定，酶標(biāo)儀打印出來的吸光度則為二者之差。630nm波長(zhǎng)下得到的吸光度是非特異的，來自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在ELISA比色測(cè)定中，使用雙波長(zhǎng)，且不必設(shè)空白孔。

 

　　二、測(cè)定的吸光度范圍
 

　　酶標(biāo)儀的吸光度測(cè)定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測(cè)定要求。早期的酶標(biāo)儀可測(cè)定的吸光度一般在0-2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達(dá)到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。
 

　　三、光學(xué)系統(tǒng)
 

　　光吸收酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測(cè)，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測(cè)定通道外，有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道，每次測(cè)定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標(biāo)儀測(cè)定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳。測(cè)定的精密度與測(cè)定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
 

　　四、檢測(cè)速度
 

　　光吸收酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度是指其完成比色測(cè)定所需要的時(shí)間。檢測(cè)速度快，有利于提高檢測(cè)的精密度，即避免由于測(cè)定過程中，因測(cè)定時(shí)間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。