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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

 ADAM8 人解整合素樣金屬蛋白酶8 規(guī)格： 48T/96T

 UU-Ab 人解脲脲原體抗體 規(guī)格： 48T/96T

 CNTF 人睫狀神經營養(yǎng)因子 規(guī)格： 48T/96T

 TB-Ab IgG 人結核菌桿抗體IgG 規(guī)格： 48T/96T

 Hpt/HP 人結合珠蛋白/觸珠蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 CTGF 人結締組織生長因子 規(guī)格： 48T/96T

 CTAPⅢ 人結締組織活化肽Ⅲ 規(guī)格： 48T/96T

 Des 人結蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 CCA 人結腸癌抗原 規(guī)格： 48T/96T

 Cav-1 人窖蛋白Caveolin1 規(guī)格： 48T/96T

 KGF 人角化細胞生長因子 規(guī)格： 48T/96T

 KAF 人角化細胞內分泌因子 規(guī)格： 48T/96T

 GDNF 人膠質細胞系來源的神經營養(yǎng)因子 規(guī)格： 48T/96T

 Collectin 人膠原凝集素 規(guī)格： 48T/96T

 Collagenase II 人膠原酶II 規(guī)格： 48T/96T

 Collagenase I 人膠原酶I 規(guī)格： 48T/96T

 EHA105 感受態(tài)細胞 100ul*100HCBⅡ 人膠原蛋白Ⅱ 規(guī)格： 48T/96T

 PYD 人膠原吡啶交聯(lián) 規(guī)格： 48T/96T

 PCP 人膠原C端肽酶 規(guī)格： 48T/96T

注意事項:

1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。