免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
戊烷脒多粘菌素B瓊脂基礎(chǔ)人胃平滑肌細(xì)胞肺成纖維細(xì)胞Biotin/BSA  生物素偶聯(lián)牛血清白蛋白

碳酸氫鈉瓊脂基礎(chǔ)人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞心肌細(xì)胞ACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39)  促腎上腺皮質(zhì)激素（18-39）(抗原)

指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)人腸平滑肌細(xì)胞心肌成纖維細(xì)胞SP (Substance P)  P物質(zhì)（抗原）

PLET瓊脂基礎(chǔ)人結(jié)腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞主動脈內(nèi)皮細(xì)胞Ghrelin  腦腸肽(一種新的生長激素釋放肽)多肽抗原

快速硫化氫試驗瓊脂人結(jié)腸平滑肌細(xì)胞主動脈平滑肌細(xì)胞Gastrin(human)peptide(1-17)  胃泌素/蛙皮素（多肽人源）

DNA酶甲基綠瓊脂基礎(chǔ)人直腸平滑肌細(xì)胞單核細(xì)胞myelin P0 prothein( peripheral myelin prothein Zero;MPZ;MPP)  外周髓鞘蛋白0(P0蛋白)多肽抗原

甘露卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)（MYP）人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞大隱靜脈平滑肌細(xì)胞Insulin protein (from porcine pancreas)  豬胰島素

胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎(chǔ)人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞-成人食管上皮細(xì)胞bovine Insulin protein   牛胰島素蛋白

ER/FITC  熒光素標(biāo)記雌激素受體IgG異戊烯半胱氨酸羧基轉(zhuǎn)移酶N-乙氧羰基-4-托品酮Rat IgA (Immunoglobulin A) 檢測試劑盒

ERAB/FITC  熒光素標(biāo)記內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白IgG鳥嘌呤核苷酸交換因子CLLD7四己基硫酸氫銨Rat IgE (Immunoglobulin E) 檢測試劑盒

ERCC1/FITC  熒光素標(biāo)記抗切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1IgG趨化素樣因子超家族成員4四己基硫酸氫銨Rat IgG (Immunoglobulin G) 檢測試劑盒

ERK1/ERK /FITC  熒光素標(biāo)記絲裂原活化蛋白激酶1IgG趨化素樣因子超家族成員77-三氟甲基喹啉Rat IgM (Immunoglobulin M) 檢測試劑盒

p-ERK1/p-MAPK-1/2 /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2IgG趨化素樣因子超家族成員5(S)-(+)-4,12-雙[二(3,5-二甲苯基)膦]-[2.2]-對環(huán)芳烷Rat NOS2/iNOS (Nitric Oxide Synthase 2, Inducible) 檢測試劑盒

ERK1/2/FITC  熒光素標(biāo)記絲裂原活化蛋白激酶1/2IgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白64B(R)-(–)-4,12-雙[二(3,5-二甲苯基)膦]-[2.2]-對環(huán)芳烷Rat INHA (Inhibin A) 檢測試劑盒

Eph receptor B2/FITC  熒光素標(biāo)記Eph receptor B2IgG組蛋白H3-K9甲基轉(zhuǎn)移酶1,1-聯(lián)苯-4-哌啶基-1-丁鹽酸鹽Rat ADH (Antidiuretic Hormone) 檢測試劑盒

ER- Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記雌激素受體αIgG趨化素樣因子超家族成員65-氟-2-肼.鹽酸鹽Rat INHbC (Inhibin Beta C) 檢測試劑盒
21號染色體開放閱讀框58抗體釀酒酵母Mouse GDNF (Glial Cl Line Derived Neurotrophic Factor)  Kit大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞

Bacillus Mouse GFAP (glial fibrillary acidic protein)  Kit大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞

釀酒酵母Mouse GC (Glucagon)  Kit  雞動脈內(nèi)皮細(xì)胞

鏈格孢M(jìn)ouse GR (glucocorticoid receptor)  Kit大鼠背根神經(jīng)細(xì)胞

黃硬皮馬勃Mouse GRα (glucocorticoid receptor α)  Kit 豬肺泡巨噬細(xì)胞

毛柄金錢(金針菇)Mouse GRβ (glucocorticoid receptor β)  Kit 人胸腺上皮細(xì)胞

狂犬病參考疫苗Mouse GCK (Glucokinase)  Kit 大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞

巨型艾美耳球蟲Mouse gp130 (Glucoprotein 130)  Kit 人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞