ELISA原理實(shí)驗(yàn)條件和技術(shù)要點(diǎn):

    ELISA原理

　　ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法（圖a）、用于檢測抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法

    在應(yīng)用ELISA時，首先要清楚下面內(nèi)容：1，是檢測抗體還是抗原？2，檢測的結(jié)果是定性還是定量？3，是否需要檢測特異抗體的類型？4，所用抗體/單克隆抗體的親和力怎樣？

    （1）檢測抗原  zui常用于檢測抗原的方法是非競爭性的雙抗體夾心法，其次是競爭法。但競爭法在具體實(shí)驗(yàn)中有些困難，特別是檢測微生物的抗原，因?yàn)樾枰獦?biāo)記抗原，這對于某些抗原是很難做到的，甚至是不可能的。另外在競爭法中，酶標(biāo)記的抗原與標(biāo)本直接混合在一起，許多標(biāo)本中含有酶抑制劑或蛋白A樣物質(zhì)，可影響ELISA的結(jié)果。

    （2）檢測抗體  檢測抗體種類常用的方法是檢測抗體種類的捕獲法，這個方法常用于檢測特異性IgG、IgA和IgM.。這個方法的*步是捕獲所需要檢測的一個種類的抗體，接下來是檢測捕獲的抗體是否是特異性抗原的抗體。間接ELISA在檢測IgG時比較簡單，但不適用于檢測其他種類的抗體，因?yàn)檠逯腥绻刑禺怚gG存在將與IgM或IgA等競爭結(jié)合抗原。

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