光學(xué)顯微鏡的分類
 

　　光學(xué)有多種分類方法：按使用目鏡的數(shù)目可分為雙目和單目；按圖像是否有立體
 

　　感可分為立體視覺和非立體視覺；按觀察對(duì)像可分為生物和金相等；按光學(xué)原理可分為偏光，相襯和微差干涉對(duì)比等；按光源類型可分為普通光、熒光、紅外光和激光等；按接收器類型可分為目視、攝影和電視等。常用的有雙目體視、金相、偏光、紫外熒光等。
 

　　雙目體視是利用雙通道光路，為左右兩眼提供一個(gè)具有立體感的圖像。它實(shí)質(zhì)上是兩個(gè)單鏡筒并列放置，兩個(gè)鏡筒的光軸構(gòu)成相當(dāng)于人們用雙目觀察一個(gè)物體時(shí)所形成的視角，以此形成三維空間的立體視覺圖像。雙目體視在生物、醫(yī)學(xué)領(lǐng)域廣泛用于切片操作和顯微*；在工業(yè)中用于微小零件和集成電路的觀測(cè)、裝配、檢查等工作。
 

　　金相是專門用于觀察金屬和礦物等不透明物體金相組織的。這些不透明物體無(wú)法在普通的透射光中觀察，故金相和普通的主要差別在于前者以反射光，而后者以透射光照明。在金相中照明光束從物鏡方向射到被觀察物體表面，被物面反射后再返回物鏡成像。這種反射照明方式也廣泛用于集成電路硅片的檢測(cè)工作。
 

　　紫外熒光是用紫外光激發(fā)熒光來(lái)進(jìn)行觀察的。某些標(biāo)本在可見光中覺察不到結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)，但經(jīng)過(guò)染色處理，以紫外光照射時(shí)可因熒光作用而發(fā)射可見光，形成可見的圖像。這類常用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中。
 

　　電視和電荷耦合器是以電視攝像靶或電荷耦合器作為接收元件的。在的實(shí)像面處裝入電視攝像靶或電荷耦合器取代人眼作為接收器，通過(guò)這些光電器件把光學(xué)圖像轉(zhuǎn)換成電信號(hào)的圖像，然后對(duì)之進(jìn)行尺寸檢測(cè)、顆粒計(jì)數(shù)等工作。這類的 可以與計(jì)算機(jī)聯(lián)用，這便于實(shí)現(xiàn)檢測(cè)和信息處理的自動(dòng)化，多應(yīng)用于需要進(jìn)行大量繁瑣檢測(cè)工作的場(chǎng)合。
 

　　掃描是成像光束能相對(duì)于物面作掃描運(yùn)動(dòng)的 。在掃描中依靠縮小視場(chǎng)來(lái)保證物鏡達(dá)到Z高的分辨率，同時(shí)用光學(xué)或機(jī)械掃描的方法，使成像光束相對(duì)于物面在較大視場(chǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，并用信息處理技術(shù)來(lái)獲得合成的大面積圖像信息。這類適用于需要高分辨率的大視場(chǎng)圖像的觀測(cè)。粗準(zhǔn)焦螺旋：大范圍上下調(diào)動(dòng)鏡筒。
 

　　細(xì)準(zhǔn)焦螺旋：小范圍上下調(diào)動(dòng)鏡筒。
 

　　另外
 

　　是一種精密的光學(xué)儀器，已有300多年的發(fā)展史。自從有了，人們看到了過(guò)去看不到的許多微小生物和構(gòu)成生物的基本單元——細(xì)胞。目前，不僅有能放大千余倍的光學(xué)，而且有放大幾十萬(wàn)倍的電子，使我們對(duì)生物體的生命活動(dòng)規(guī)律有了更進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)。在普通中學(xué)生物教學(xué)大綱中規(guī)定的實(shí)驗(yàn)中，大部分要通過(guò)來(lái)完成，因此，性能的好壞是做好觀察實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。
 

　　一、的光學(xué)系統(tǒng)
 

　　的光學(xué)系統(tǒng)主要包括物鏡、目鏡、反光鏡和聚光器四個(gè)部件。廣義的說(shuō)也包括照明光源、濾光器、蓋玻片和載玻片等。
 

　?。ㄒ唬?、物鏡
 

　　物鏡是決定性能的Z重要部件，安裝在物鏡轉(zhuǎn)換器上，接近被觀察的物體，故叫做物鏡或接物鏡。
 

　　1、物鏡的分類
 

　　物鏡根據(jù)使用條件的不同可分為干燥物鏡和浸液物鏡；其中浸液物鏡又可分為水浸物鏡和油浸物鏡（常用放大倍數(shù)為90—100倍）。
 

　　根據(jù)放大倍數(shù)的不同可分為 低倍物鏡（10倍以下）、中倍物鏡（20倍左右）高倍物鏡（40—65倍）。
 

　　根據(jù)像差矯正情況，分為消色差物鏡（常用，能矯正光譜中兩種色光的色差的物鏡）和復(fù)色差物鏡（能矯正光譜中三種色光的色差的物鏡，價(jià)格貴，使用少）。
 

　　2、物鏡的主要參數(shù)：
 

　　物鏡主要參數(shù)包括：放大倍數(shù)、數(shù)值孔徑和工作距離。
 

　　①、放大倍數(shù)是指眼睛看到像的大小與對(duì)應(yīng)標(biāo)本大小的比值。它指的是長(zhǎng)度的比值而不是面積的比值。例：放大倍數(shù)為100×，指的是長(zhǎng)度是1μm的標(biāo)本，放大后像的長(zhǎng)度是100μm，要是以面積計(jì)算，則放大了10,000倍。
 

　　的總放大倍數(shù)等于物鏡和目鏡放大倍數(shù)的乘積。
 

　　②、數(shù)值孔徑也叫鏡口率，簡(jiǎn)寫NA 或A，是物鏡和聚光器的主要參數(shù)，與的分辨力成正比。干燥物鏡的數(shù)值孔徑為0.05-0.95，油浸物鏡（香柏油）的數(shù)值孔徑為1.25。
 

　　③、工作距離是指當(dāng)所觀察的標(biāo)本Z清楚時(shí)物鏡的前端透鏡下面到標(biāo)本的蓋玻片上面的距離。物鏡的工作距離與物鏡的焦距有關(guān)，物鏡的焦距越長(zhǎng)，放大倍數(shù)越低，其工作距離越長(zhǎng)。例：10倍物鏡上標(biāo)有10/0.25和160/0.17，其中10為物鏡的放大倍數(shù)；0.25為數(shù)值孔徑；160為鏡筒長(zhǎng)度（單位mm）；0.17為蓋玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度（單位 mm）。10倍物鏡有效工作距離為6.5mm，40倍物鏡有效工作距離為0.48mm 。
 

　　3、物鏡的作用是將標(biāo)本作*次放大，它是決定性能的Z重要的部件——分辨力的高低。
 

　　分辨力也叫分辨率或分辨本領(lǐng)。分辨力的大小是用分辨距離（所能分辨開的兩個(gè)物點(diǎn)間的Z小距離）的數(shù)值來(lái)表示的。在明視距離（25cm）之處，正常人眼所能看清相距0.073mm的兩個(gè)物點(diǎn)，這個(gè)0.073mm的數(shù)值，即為正常人眼的分辨距離。的分辨距離越小，即表示它的分辨力越高，也就是表示它的性能越好。
 

　　的分辨力的大小由物鏡的分辨力來(lái)決定的，而物鏡的分辨力又是由它的數(shù)值孔徑和照明光線的波長(zhǎng)決定的。
 

　　當(dāng)用普通的*照明法（使光線均勻地透過(guò)標(biāo)本的明視照明法）時(shí)，的分辨距離為d=0.61λ/NA
 

　　式中d——物鏡的分辨距離，單位 nm。
 

　　λ——照明光線波長(zhǎng)，單位 nm。
 

　　NA ——物鏡的數(shù)值孔徑
 

　　例如油浸物鏡的數(shù)值孔徑為1.25，可見光波長(zhǎng)范圍為400—700nm ，取其平均波長(zhǎng)550 nm，則d=270 nm，約等于照明光線波長(zhǎng)一半。一般地，用可見光照明的分辨力的極限是0.2μm。
 

　?。ǘ?、目鏡
 

　　因?yàn)樗拷^察者的眼睛，因此也叫接目鏡。安裝在鏡筒的上端。
 

　　1、目鏡的結(jié)構(gòu)
 

　　通常目鏡由上下兩組透鏡組成，上面的透鏡叫做接目透鏡，下面的透鏡叫做會(huì)聚透鏡或場(chǎng)鏡。上下透鏡之間或場(chǎng)鏡下面裝有一個(gè)光闌（它的大小決定了視場(chǎng)的大?。?，因?yàn)闃?biāo)本正好在光闌面上成像，可在這個(gè)光闌上粘一小段毛發(fā)作為指針，用來(lái)指示某個(gè)特點(diǎn)的目標(biāo)。也可在其上面放置目鏡測(cè)微尺，用來(lái)測(cè)量所觀察標(biāo)本的大小。
 

　　目鏡的長(zhǎng)度越短，放大倍數(shù)越大（因目鏡的放大倍數(shù)與目鏡的焦距成反比）。
 

　　2、目鏡的作用
 

　　是將已被物鏡放大的，分辨清晰的實(shí)像進(jìn)一步放大，達(dá)到人眼能容易分辨清楚的程度。
 

　　常用目鏡的放大倍數(shù)為5—16倍。
 

　　3、目鏡與物鏡的關(guān)系
 

　　物鏡已經(jīng)分辨清楚的細(xì)微結(jié)構(gòu)，假如沒有經(jīng)過(guò)目鏡的再放大，達(dá)不到人眼所能分辨的大小，那就看不清楚；但物鏡所不能分辨的細(xì)微結(jié)構(gòu)，雖然經(jīng)過(guò)高倍目鏡的再放大，也還是看不清楚，所以目鏡只能起放大作用，不會(huì)提高的分辨率。有時(shí)雖然物鏡能分辨開兩個(gè)靠得很近的物點(diǎn)，但由于這兩個(gè)物點(diǎn)的像的距離小于眼睛的分辨距離，還是無(wú)法看清。所以，目鏡和物鏡即相互，又彼此制約。
 

　?。ㄈ?、聚光器
 

　　聚光器也叫集光器。位于標(biāo)本下方的聚光器支架上。它主要由聚光鏡和可變光闌組成。其中，聚光鏡可分為明視場(chǎng)聚光鏡（普通配置）和暗視場(chǎng)聚光鏡。
 

　　1、光鏡的主要參數(shù)
 

　　數(shù)值孔徑（NA ）是聚光鏡的主要參數(shù)，Z大數(shù)值孔徑一般是1.2—1.4，數(shù)值孔徑有一定的可變范圍，通常刻在上方透鏡邊框上的數(shù)字是代表Z大的數(shù)值孔徑，通過(guò)調(diào)節(jié)下部可變光闌的開放程度，可得到此數(shù)字以下的各種不同的數(shù)值孔徑，以適應(yīng)不同物鏡的需要。有的聚光鏡由幾組透鏡組成，Z上面的一組透鏡可以卸掉或移出光路，使聚光鏡的數(shù)值孔徑變小，以適應(yīng)低倍物鏡觀察時(shí)的照明。
 

　　2、聚光鏡的作用
 

　　聚光鏡的作用相當(dāng)于凸透鏡，起會(huì)聚光線的作用，以增強(qiáng)標(biāo)本的照明。一般地把聚光鏡的聚光焦點(diǎn)設(shè)計(jì)在它上端透鏡平面上方約1.25mm處。（聚光焦點(diǎn)正在所要觀察的標(biāo)本上，載玻片的厚度為1.1mm左右）
 

　　3、可變光闌
 

　　可變光闌也叫光圈，位于聚光鏡的下方，由十幾張金屬薄片組成，中心部分形成圓孔。其作用是調(diào)節(jié)光強(qiáng)度和使聚光鏡的數(shù)值孔徑與物鏡的數(shù)值孔徑相適應(yīng)?？勺児怅@開得越大，數(shù)值孔徑越大（觀察完畢后，應(yīng)將光圈調(diào)至Z大）。
 

　　在可變光闌下面，還有一個(gè)圓形的濾光片托架。
 

　　說(shuō)明：在中學(xué)實(shí)驗(yàn)室只有教師用（1600×或1500×）才配有聚光器，學(xué)生用（640×或500×）配的是旋轉(zhuǎn)光欄。緊貼在載物臺(tái)下，能做圓周轉(zhuǎn)動(dòng)的圓盤，旋轉(zhuǎn)光欄（也稱為遮光器），光欄上有大小不等的圓孔，叫光圈。直徑分別為2、3、6、12、16mm,轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)光欄，光欄上每個(gè)光圈都可以對(duì)正通光孔，通過(guò)大小不等的光圈來(lái)調(diào)節(jié)光線的強(qiáng)弱。
 

　　（四）反光鏡
 

　　反光鏡是一個(gè)可以隨意轉(zhuǎn)動(dòng)的雙面鏡，直徑為50mm，一面為平面，一面為凹面，其作用是將從任何方向射來(lái)的光線經(jīng)通光孔反射上來(lái)。平面鏡反射光線的能力較弱，是在光線較強(qiáng)時(shí)使用，凹面鏡反射光線的能力較強(qiáng)，是在光線較弱時(shí)使用。
 

　　反光鏡通常一面是平面鏡，另一面是凹面鏡，裝在聚光器下面，可以在水平與垂直兩個(gè)方向上任意旋轉(zhuǎn)。
 

　　反光鏡的作用是使由光源發(fā)出的光線或天然光射向聚光器。當(dāng)用聚光器時(shí)一般用平面鏡，不用時(shí)用凹面鏡；當(dāng)光線強(qiáng)時(shí)用平面鏡，弱時(shí)用凹面鏡。
 

　　觀察完畢后，應(yīng)將反光鏡垂直放置。
 

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　　的照明可以用天然光源或人工光源
 

　　1、天然光源
 

　　光線來(lái)自天空，是由白云反射來(lái)的。不可利用直接照來(lái)的太陽(yáng)光。
 

　　2、人工光源
 

　?、?、對(duì)人工光源的基本要求：有足夠的發(fā)光強(qiáng)度；光源發(fā)熱不能過(guò)多。
 

　?、?、常用的人工光源：燈；日光燈
 

　　（六）濾光器
 

　　安裝在光源和聚光器之間。作用是讓所選擇的某一波段的光線通過(guò)，而吸收掉其他的光線，即為了改變光線的光譜成分或削弱光的強(qiáng)度。分為兩大類：濾光片和液體濾光器。
 

　　（七）蓋玻片和載玻片
 

　　蓋玻片和載玻片的表面應(yīng)相當(dāng)平坦，無(wú)氣泡，無(wú)劃痕。選用無(wú)色，透明度好的，使用前應(yīng)洗凈。
 

　　蓋玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度是0.17±0.02mm，如不用蓋玻片或蓋玻片厚度不合適，都回影響成像質(zhì)量。
 

　　載玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度是1.1±0.04mm，一般可用范圍是1—1.2mm，若太厚會(huì)影響聚光器效能，太薄則容易破裂。
 

　　二、的機(jī)械裝置
 

　　的機(jī)械裝置是的重要組成部分。其作用是固定與調(diào)節(jié)光學(xué)鏡頭，固定與移動(dòng)標(biāo)本等。主要有鏡座、鏡臂、載物臺(tái)、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、與調(diào)焦裝置組成。
 

　?。ㄒ唬?、鏡座和鏡臂
 

　　1、鏡座 作用是支撐整個(gè)，裝有反光鏡，有的還裝有照明光源。
 

　　2、鏡臂 作用是支撐鏡筒和載物臺(tái)。分固定、可傾斜兩種。
 

　?。ǘ?、載物臺(tái)（又稱工作臺(tái)、鏡臺(tái)）
 

　　載物臺(tái)作用是安放載玻片，形狀有圓形和方形兩種，其中方形的面積為120mm×110mm。中心有一個(gè)通光孔，通光孔后方左右兩側(cè)各有一個(gè)安裝壓片夾用的小孔。分為固定式與移動(dòng)式兩種。有的載物臺(tái)的縱橫坐標(biāo)上都裝有游標(biāo)尺，一般讀數(shù)為0.1mm，游標(biāo)尺可用來(lái)測(cè)定標(biāo)本的大小，也可用來(lái)對(duì)被檢部分做標(biāo)記。
 

　?。ㄈ?、鏡筒
 

　　鏡筒上端放置目鏡，下端連接物鏡轉(zhuǎn)換器。分為固定式和可調(diào)節(jié)式兩種。機(jī)械筒長(zhǎng)（從目鏡管上緣到物鏡轉(zhuǎn)換器螺旋口下端的距離稱為鏡筒長(zhǎng)度或機(jī)械筒長(zhǎng)）不能變更的叫做固定式鏡筒，能變更的叫做調(diào)節(jié)式鏡筒，新式大多采用固定式鏡筒，國(guó)產(chǎn)也大多采用固定式鏡筒，國(guó)產(chǎn)的機(jī)械筒長(zhǎng)通常是160mm。
 

　　安裝目鏡的鏡筒，有單筒和雙筒兩種。單筒又可分為直立式和傾斜式兩種，雙筒則都是傾斜式的。其中雙筒，兩眼可同時(shí)觀察以減輕眼睛的疲勞。雙筒之間的距離可以調(diào)節(jié)，而且其中有一個(gè)目鏡有屈光度調(diào)節(jié)（即視力調(diào)節(jié)）裝置，便于兩眼視力不同的觀察者使用。
 

　　（四）、物鏡轉(zhuǎn)換器
 

　　物鏡轉(zhuǎn)換器固定在鏡筒下端，有3—4個(gè)物鏡螺旋口，物鏡應(yīng)按放大倍數(shù)高低順序排列。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器時(shí)，應(yīng)用手指捏住旋轉(zhuǎn)碟旋轉(zhuǎn)，不要用手指推動(dòng)物鏡，因時(shí)間長(zhǎng)容易使光軸歪斜，使成像質(zhì)量邊壞。
 

　?。ㄎ澹?、調(diào)焦裝置
 

　　上裝有粗準(zhǔn)焦螺旋和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。有的粗準(zhǔn)焦螺旋與裝在同一軸上，大螺旋為粗準(zhǔn)焦螺旋，小螺旋為細(xì)準(zhǔn)焦螺旋；有的則分開安置，位于鏡臂的上端較大的一對(duì)螺旋為是粗準(zhǔn)焦螺旋，其轉(zhuǎn)動(dòng)一周，鏡筒上升或下降10mm。 位于粗準(zhǔn)焦螺旋下方較小的一對(duì)螺旋為細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，其轉(zhuǎn)動(dòng)一周，鏡筒升降值為0.1mm，細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)焦范圍不小于1.8mm。
 

　　三、及其部件的使用
 

　　1、使用單筒時(shí)，要養(yǎng)成用左眼觀察的習(xí)慣（因一般用右手畫圖），觀察時(shí)要兩眼同時(shí)睜開，不要睜一只閉一只，因?yàn)檫@樣易于疲勞。為了訓(xùn)練學(xué)生習(xí)慣于兩眼同時(shí)睜開觀察，可剪一塊長(zhǎng)約14cm，寬約6cm的長(zhǎng)方形硬紙片，在靠近左端處挖一個(gè)直徑比鏡筒上端外徑略小的圓孔，把圓孔套在鏡筒上段，觀察時(shí)兩眼同時(shí)睜開，利用紙片的右端擋住右眼的視線，這樣訓(xùn)練一段時(shí)間后，就能習(xí)慣于兩眼同時(shí)睜開，然后把紙片去掉。
 

　　2、直筒的鏡臂與鏡座連接處，是一個(gè)機(jī)械關(guān)節(jié)，可用于調(diào)節(jié)鏡筒的傾斜度，便于觀察，鏡臂不能過(guò)于后傾，一般不超過(guò)40°。但是在使用臨時(shí)裝片觀察時(shí)，禁止使用傾斜關(guān)節(jié)（當(dāng)鏡筒傾斜時(shí)，載物臺(tái)也隨之傾斜，載玻片上的液體易流出），尤其是裝片內(nèi)含酸性試劑時(shí)嚴(yán)禁使用，以免污損鏡體。
 

　　3、目鏡和物鏡的使用
 

　　一般都是用一個(gè)放大倍數(shù)適中的目鏡（10×）和Z低倍的物鏡開始觀察，逐步改用倍數(shù)較高的物鏡，從中找到符合實(shí)驗(yàn)要求的放大倍數(shù)。
 

　　轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)，先用低倍鏡觀察，調(diào)節(jié)到正確的工作距離（成像Z清晰）。如果進(jìn)一步使用高倍物鏡觀察，應(yīng)在轉(zhuǎn)換高倍物鏡之前，把物像中需要放大觀察的部分移至視野*（將低倍物鏡轉(zhuǎn)換成高倍物鏡觀察時(shí)，視野中的物像范圍縮小了很多）。低倍物鏡和高倍物鏡基本齊焦（同高調(diào)焦），在用低倍物鏡觀察清晰時(shí)，換高倍物鏡應(yīng)可以見到物像，但物像不一定很清晰，可以轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋進(jìn)行調(diào)節(jié)。
 

　　通常認(rèn)為，使用任何一個(gè)物鏡時(shí)，有效放大倍數(shù)的上限是1，000乘它的數(shù)值孔徑，下限是250乘它的數(shù)值孔徑。如40×物鏡的數(shù)值孔徑是0.65，則上、下限分別為：1000×0.65=650倍和250×0.65≈163倍，超過(guò)有效放大倍數(shù)上限的叫做無(wú)效放大，不能提高觀察效果。低于下限的放大倍數(shù)則人眼無(wú)法分辨，不利于觀察。一般Z實(shí)用的放大倍數(shù)范圍是500—700乘數(shù)值孔徑之間的數(shù)字。
 

　　4、油浸物鏡的使用
 

　　使用油浸物鏡時(shí)，一般不要使用同高調(diào)焦。同高調(diào)焦只適用于每臺(tái)的原配物鏡，在使用低倍和高倍物鏡時(shí)，是一個(gè)極有利的方便條件，但在使用油浸物鏡時(shí)，則受到一定限制，一般地說(shuō)，用油鏡觀察未加蓋玻片的標(biāo)本片（載玻片）時(shí)，利用同高調(diào)焦的安全度較大，而對(duì)于有蓋玻片的標(biāo)本片，要小心使用，因?yàn)橛徒镧R的工作距離很短，在設(shè)計(jì)和裝配時(shí)所考慮的同高是對(duì)標(biāo)準(zhǔn)厚度蓋玻片的。
 

　　用油浸物鏡時(shí)，只在標(biāo)本片上滴香柏油。觀察完畢后，要及時(shí)進(jìn)行清潔工作，如不及時(shí)進(jìn)行，香柏油粘上灰塵，擦拭時(shí)灰塵粒子可能磨損透鏡，香柏油在空氣中暴露時(shí)間長(zhǎng)，還會(huì)變稠、變干，擦拭很困難，對(duì)儀器很不利。擦拭要細(xì)心，動(dòng)作要輕。油浸物鏡前端先用干的擦鏡紙擦一兩次，把大部分油去掉，再用二甲苯滴濕的擦鏡紙擦兩次，Z后再用干的擦鏡紙擦一次。標(biāo)本片上的香柏油可用“拉紙法”（即把一小張擦鏡紙蓋在香柏油上，然后在紙上滴一些二甲苯，趁濕把紙往外拉，這樣連續(xù)三四次，即可干凈，一般不會(huì)損壞未加蓋玻片的涂片標(biāo)本）擦凈。擦鏡紙也要防塵，一般在使用前，將每頁(yè)剪成8小塊，貯存在一個(gè)干凈的小培養(yǎng)皿中，用起來(lái)既節(jié)省又方便。
 

　　5、聚光器的使用方法
 

　　①、使用聚光器的原因
 

　　當(dāng)放大倍數(shù)增加時(shí)，一方面由于放大倍數(shù)越高，透鏡數(shù)目越多，被透鏡吸收的光線也越多；另一方面由于視場(chǎng)（指的是所能看到被檢標(biāo)本的范圍）的亮度與放大倍數(shù)的平方成反比，即放大倍數(shù)越高，視場(chǎng)越暗。為了得到足夠的亮度，必須安裝聚光器，把光線集中到所要觀察的標(biāo)本上。
 

　?、?、觀察時(shí)聚光器應(yīng)處的高度
 

　　觀察時(shí)，要保證得到的觀察效果，聚光器的聚光焦點(diǎn)應(yīng)正好落在標(biāo)本上。要實(shí)現(xiàn)這個(gè)條件，就必須調(diào)節(jié)聚光器的高度。當(dāng)用平行光照明時(shí)，聚光器的聚光焦點(diǎn)是在它上端透鏡平面中心上方約1.25mm之處，因此，人們常常要求在觀察時(shí)將聚光器上升到它上端透鏡平面僅稍稍低于載物臺(tái)平面的高度，這樣聚光焦點(diǎn)就可能落到位于標(biāo)準(zhǔn)厚度載玻片上的標(biāo)本上。當(dāng)使用比標(biāo)準(zhǔn)厚度薄的載玻片來(lái)承放標(biāo)本時(shí)，聚光器的位置要相應(yīng)地降低一些，而當(dāng)使用過(guò)厚地載玻片時(shí)，聚光焦點(diǎn)只能落在標(biāo)本下方，不利于精細(xì)的觀察。
 

　　③、聚光器與物鏡的配合
 

　　這里所謂的配合，就是使聚光器和物鏡這兩者的數(shù)值孔徑取得一致，以更好的進(jìn)行較為精細(xì)的觀察。假如聚光器的數(shù)值孔徑低于物鏡，那物鏡的部分?jǐn)?shù)值孔徑就浪費(fèi)了，從而達(dá)不到它的Z高分辨力。假如把聚光器的數(shù)值孔徑大于物鏡的數(shù)值孔徑，則一方面不能提高物鏡的規(guī)定分辨力，另一方面反會(huì)由于照明光束過(guò)寬，使物象的清晰度下降。聚光器與物鏡配合的操作方法是：在完成照明、調(diào)焦操作后，取下目鏡直接向鏡筒中看，把聚光器下的可變光闌關(guān)到Z小，再慢慢地開大。開到它的口徑與所見視場(chǎng)的直徑恰好一樣大，然后按上目鏡，即可進(jìn)行觀察。每轉(zhuǎn)換一次物鏡，都要隨著進(jìn)行依次這樣的配合操作。有的聚光器可變光闌的邊框上刻有表示開啟口徑的尺度，可以根據(jù)刻度來(lái)進(jìn)行配合。
 

　　歷*的發(fā)明和的每一次創(chuàng)新都給人類的認(rèn)知帶來(lái)了飛躍式的發(fā)展；給人類的生活帶來(lái)了的拓展。在提倡科技創(chuàng)新的今天，的使用已經(jīng)成為中學(xué)生的一項(xiàng)基本技能，掌握結(jié)構(gòu)，科學(xué)使用，良好維護(hù)，使之成為廣大青少年探索未來(lái)世界的一個(gè)窗口。
 

　　光學(xué)的調(diào)試
 

　　一、照明光路系統(tǒng)的調(diào)整：
 

　　為了使的視野能受到均勻而又充分的照明，在初次安裝和調(diào)試時(shí)，就必須把照明光路系統(tǒng)調(diào)整好，這是正確使用，并獲得正確、可*結(jié)果的重要手段和Z基本的要求。此外，正確掌握照明光路系統(tǒng)的調(diào)整，是使用過(guò)程中更換光源燈泡后所必經(jīng)的步驟，也是在日常使用過(guò)程中不時(shí)地檢驗(yàn)性能的必要手段。照明光路系統(tǒng)的調(diào)整主要有以下4項(xiàng)內(nèi)容：
 

　　1、照明光源燈室在顯微外的初步調(diào)整
 

　?、?首先將燈室的外殼打開，壓彈簧夾子將鹵素?zé)襞菅b入插座中，安裝時(shí)避免手指直接接觸燈泡（可用柔軟的布或紙隔?。?，以免燈泡上留有指紋等臟物，影響燈泡的使用壽命。
 

　?、?把燈室擺在桌面上，接通電源后，用的螺絲刀調(diào)節(jié)燈的調(diào)焦旋鈕孔（標(biāo)有“←→”），使燈絲投影在1-2m外的墻上，將燈絲成像調(diào)至清晰；然后調(diào)節(jié)燈的高低位置調(diào)節(jié)絲孔（標(biāo)有“──”），使燈絲位置高低適當(dāng)；再調(diào)節(jié)燈的左右位置調(diào)節(jié)螺絲孔（標(biāo)有“──”），使燈絲左右位置合適。
 

　　2、光源發(fā)光體（燈絲）在內(nèi)位置的檢驗(yàn)和校正　目的是為了把發(fā)光體的像端端正正地調(diào)入物鏡的視域范圍內(nèi)，從光源的角度去確保的視域受到充分而均勻的照明，這是調(diào)整庫(kù)勒照明系統(tǒng)的前提條件。需要的基本工具：對(duì)中望遠(yuǎn)鏡購(gòu)置時(shí)已配備。
 

　?、?拔掉燈庫(kù)內(nèi)的毛玻璃套筒，把燈室裝回上；
 

　?、?選用10×物鏡，開亮光源程序找樣品并調(diào)焦清晰，再換用40×物鏡把樣品調(diào)焦清晰（40×物鏡可以看清燈絲的全貌）；
 

　?、?把聚光鏡的孔徑光闌和視場(chǎng)光闌均開到Z大；
 

　　④ 拔掉其中一個(gè)目鏡，換上對(duì)中望遠(yuǎn)鏡，抓住白色部分，另一手伸縮黑色接目鏡，就可在視野中看到燈絲像；
 

　?、?如燈絲位置不合適，調(diào)“──”孔，把燈絲像沿水平方向調(diào)好，調(diào)“──”孔，把絲像沿垂直方向調(diào)好，直至將燈絲像調(diào)至剛好充滿物鏡孔徑的光圓像；
 

　?、?調(diào)整完畢后，將毛玻璃套筒插回原位，拔掉對(duì)中望遠(yuǎn)鏡，換回目鏡作下一步調(diào)整。以上所述照明光源燈室在外的調(diào)整和光源發(fā)光體在內(nèi)位置的校驗(yàn)，只需在初次安裝調(diào)試及更換燈泡時(shí)進(jìn)行，平時(shí)使用時(shí)不能隨意亂調(diào)亂動(dòng)。萬(wàn)一調(diào)亂時(shí)，可按上述步驟調(diào)回原狀。
 

　　3、庫(kù)勒照明（Kohler）系統(tǒng)的正確調(diào)整　的正確調(diào)試，主要工作之一是照明光路系統(tǒng)的調(diào)整，而其中的關(guān)鍵是庫(kù)勒照明系統(tǒng)的調(diào)整。對(duì)于每一位使用的人員，特別是作顯微照像的人員來(lái)說(shuō)，應(yīng)該對(duì)庫(kù)勒照明系統(tǒng)的原理及其調(diào)整步驟有一定的了解和掌握，才能充分發(fā)揮應(yīng)有的功能，拍出來(lái)的照片才能在效果上比較一致而又完善。庫(kù)勒照明系統(tǒng)的原理簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是：光源發(fā)光體上任意一點(diǎn)發(fā)出的光，可以照明的視域范圍，而光源發(fā)光體上每一點(diǎn)所發(fā)出的光匯集起來(lái)，在的視域中就實(shí)現(xiàn)了非常充分而又均勻的照明。調(diào)整庫(kù)勒照明系統(tǒng)的目的，是為了使所觀察的視域能獲得均勻而又充分的照明，防止雜散光對(duì)照像系統(tǒng)造成影響或干擾，以免照像時(shí)在底片形成灰霧。高調(diào)整庫(kù)勒照明系統(tǒng)的必要部件：視場(chǎng)光闌、可進(jìn)行合軸調(diào)整的聚光鏡系統(tǒng)。
 

　?、?選用10×物鏡和10×目鏡；
 

　　② 把聚光鏡前端透鏡擺進(jìn)光路中，孔徑光闌調(diào)至適中的位置上（不大不小），再把聚光鏡升到Z頂?shù)奈恢蒙?，聚光鏡轉(zhuǎn)盤調(diào)至明視野“J”位置；
 

　?、?把視場(chǎng)光闌調(diào)至Z小（0.1）；
 

　?、?載物臺(tái)上放上已封片的生物樣品，開亮光源，調(diào)焦清晰；
 

　?、?視域中會(huì)出現(xiàn)一個(gè)局部照明的區(qū)域或亮斑，這是視場(chǎng)光闌的模糊像，在其中可以清晰地看到樣品的細(xì)節(jié)；在它之外是較暗的視域，不一定能把樣品的細(xì)節(jié)看得清楚；
 

　?、?把聚光鏡微微地向下調(diào)，使視野中的亮斑逐漸收小，慢慢變成一個(gè)清晰的多邊形象，這便是視場(chǎng)光闌的清晰像；
 

　?、?一般情況下，多邊形象并不在視域*，需要調(diào)整聚光鏡的一對(duì)調(diào)中螺絲，把視場(chǎng)光闌多邊形的像調(diào)至*位置；
 

　?、?逐漸開大視場(chǎng)光闌，使多邊形象成為視域的內(nèi)接多邊形，進(jìn)一步核對(duì)調(diào)中的狀況，如對(duì)中不夠理想，繼續(xù)微微調(diào)對(duì)中螺絲；
 

　?、?將視場(chǎng)光闌稍為再微微開大一些，使它的多邊形象恰好消失在視域的邊緣上，至此，庫(kù)勒照明系統(tǒng)調(diào)整完畢。庫(kù)勒照明系統(tǒng)調(diào)整好以后，整個(gè)視域照明均勻，拍攝的顯微照片明亮清晰，反差正常。在日后使用過(guò)程中應(yīng)特別注意： a. 視場(chǎng)光闌不可任意開大，但可隨物鏡倍數(shù)的增大而將視場(chǎng)光闌收小，隨物鏡倍數(shù)的減小而開大； b. 聚光鏡的高低位置不準(zhǔn)亂調(diào)，否則會(huì)破壞已調(diào)整好的庫(kù)勒照明系統(tǒng)； c. 使用10×以下物鏡時(shí)要將聚光鏡前端透鏡擺出光路外，使用10×或10×以上物鏡時(shí)要將前端透鏡擺入光路中； d. 關(guān)于物鏡倍數(shù)與視場(chǎng)光闌大小配合問(wèn)題，在實(shí)際使用過(guò)程中，作為一般觀察不一定要收小或開大視場(chǎng)光闌，但作顯微照相時(shí)，為了避免雜散光線對(duì)照相系統(tǒng)的干擾，以便能拍攝到較完善的照片，則應(yīng)在使用每一個(gè)倍數(shù)的物鏡時(shí)，把視場(chǎng)光闌調(diào)節(jié)到正好消失于所觀察的視域邊上，這是比較繁復(fù)的工作，但又非做不可。較為簡(jiǎn)便的方法是把與各個(gè)倍數(shù)物鏡相對(duì)應(yīng)的視場(chǎng)光闌事先調(diào)整好，并作好記號(hào)，以后使用時(shí)根據(jù)記號(hào)直接調(diào)至相應(yīng)的位置。
 

　　4、孔徑光闌的正確使用　由于聚光鏡的孔徑光闌可以影響的分辨率，使用時(shí)應(yīng)掌握正確的使用方法。過(guò)去由于對(duì)孔徑光闌的認(rèn)識(shí)不足，往往把它當(dāng)作是調(diào)節(jié)視野亮度的工具。雖然調(diào)節(jié)孔徑光闌在一定程度上可以改變視野的亮度，但會(huì)直接影響成像的反差、對(duì)比度及分辨率，在使用過(guò)程中應(yīng)盡可能避免。為了發(fā)揮聚光鏡孔徑光闌的作用，以便在觀察時(shí)，尤其在作顯微照相時(shí)獲得Z佳分辨率，在每換用一個(gè)倍數(shù)的物鏡時(shí)，在樣品調(diào)焦清晰后，需要調(diào)節(jié)孔徑光闌，使它的大小正好等于所用物鏡數(shù)值孔徑（物鏡孔徑像）的2/3 。 調(diào)整方法是用對(duì)中望遠(yuǎn)鏡對(duì)焦于視野中黑色相差環(huán)上，調(diào)節(jié)孔徑光闌，可以看到一個(gè)多邊形的孔徑光闌像，然后調(diào)到等于物鏡孔徑像的2/3，即介于黑色相差環(huán)外與圓形視域內(nèi)之間。為方便起見，可把與各倍數(shù)物鏡相對(duì)應(yīng)的孔徑光闌預(yù)先調(diào)整好，并作好標(biāo)記，以免每次使用都要重新調(diào)整。
 

　　二、成像光路系統(tǒng)的調(diào)整及檢術(shù)概要：
 

　　成像光路系統(tǒng)的調(diào)整，是根據(jù)不同檢術(shù)的需要而進(jìn)行的。所謂檢術(shù)（microscopy），概括而言就是以觀察樣品時(shí)所使用的照明方法，以及如何使樣品所成的像能獲得更良好反差的技術(shù)與方法。以下簡(jiǎn)述檢術(shù)中已成熟的幾種方法及對(duì)應(yīng)的成像光路系統(tǒng)的調(diào)整方法。
 

　　1、透射光明視野：
 

　　這是自發(fā)明以來(lái)Z傳統(tǒng)、Z普遍的應(yīng)用方法?；静考?a. 物鏡：任何物鏡都可作明視野觀察； b. 聚光鏡：各種聚光鏡均可，配有孔徑光闌。調(diào)整方法：在上述的庫(kù)勒照明系統(tǒng)調(diào)整好后，即可應(yīng)用明視野法。適用范圍：所有已染色的組織切片、血液涂片等。注意事項(xiàng)： a. 使用明視野方法觀察時(shí)，一定要將庫(kù)勒照明系統(tǒng)調(diào)整好； b. 視場(chǎng)光闌不可任意開大，使用10×、10×以下和10×以上物鏡時(shí)，要將聚光鏡前端透鏡分別擺事實(shí)出和擺進(jìn)光路中； c. 不可用聚光鏡的孔徑光闌來(lái)調(diào)節(jié)視野的亮度，更不要亂調(diào)聚光鏡的高低位置，否則，會(huì)降低的分辨率和破壞已調(diào)整好的庫(kù)勒照明系統(tǒng)； d. 作顯微照相時(shí)，每換用一個(gè)倍數(shù)的物鏡，就要調(diào)節(jié)聚光鏡的孔徑光闌，使它的大小正好等于所用物鏡數(shù)值孔徑的2/3 。
 

　　2、透射光相差法：
 

　　這是現(xiàn)代檢術(shù)中的一種反差增強(qiáng)法?；静考合嗖钗镧R、明視野與相差兼用的多用途聚光鏡、對(duì)中望遠(yuǎn)鏡、綠色濾光片。
 

　　調(diào)整方法：
 

　　a. 在庫(kù)勒照明系統(tǒng)調(diào)整好的基礎(chǔ)上，用明視野方法把樣品調(diào)焦清晰；
 

　　b. 把聚光鏡轉(zhuǎn)到Ph1對(duì)準(zhǔn)轉(zhuǎn)盤刻度線位置，選用10×相差物鏡，換上待觀察的透明樣品；
 

　　c. 拔掉其中一個(gè)目鏡，換上對(duì)中望遠(yuǎn)鏡，并調(diào)焦于視野中的兩個(gè)相差環(huán)上（物鏡的黑色相差環(huán)和聚光鏡的透光相差環(huán)）；
 

　　d. 視野中的兩個(gè)相差環(huán)不一定重合，調(diào)節(jié)聚光鏡上的兩個(gè)調(diào)節(jié)裝置（調(diào)整相差環(huán)左右位置的調(diào)節(jié)桿和調(diào)整前后位置的摩擦式轉(zhuǎn)鈕），使透光環(huán)作前后左右移動(dòng)而與黑環(huán)重合；
 

　　e. 調(diào)整好后，換回觀察用目鏡，將綠色濾光片按入光路中，即可觀察到樣品的相差像；
 

　　f. 有20×和40×物鏡觀察時(shí)，聚光鏡應(yīng)設(shè)在Ph2位置上，用100物鏡時(shí)，聚光鏡應(yīng)設(shè)在Ph3位置上。
 

　　適用范圍：適用于觀察透明、未染色或不能染色的樣品，如各種細(xì)胞、活組織、未染色或不染色的組織切片、水生生物等。
 

　　3、微分干涉相襯法：
 

　　為了克服相差法觀察時(shí)樣品細(xì)節(jié)像周圍伴隨有光暈，會(huì)掩沒掉本來(lái)應(yīng)該看見的細(xì)節(jié)，以及樣品或組織切片厚度要求相當(dāng)薄，原則上下能厚于10?m等局限性，利用雙光束干涉的原理設(shè)計(jì)子微分干涉相襯法。
 

　　調(diào)整方法：
 

　　a. 必須在庫(kù)勒明系統(tǒng)已調(diào)好的基礎(chǔ)上才能調(diào)好DIC方法；
 

　　b. 先用10×物鏡，以明視野先確定好能把樣品看清晰的物鏡調(diào)焦位置；
 

　　c. 把起偏器（polarizer）擺入照明光路中，注意其取向應(yīng)為東—西方向；
 

　　d. 把聚光鏡轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)到與10×物鏡對(duì)應(yīng)使用的位置上，即DIC 0.3—0.4；
 

　　e. 在物鏡后方或物鏡轉(zhuǎn)換器上插入10×物鏡使用的DIC插片（DIC slider）；
 

　　f. 把檢偏器（analyser）插入成像光路中，注意其取向應(yīng)為南—北方；
 

　　g. 換上待觀察的透明樣品，開亮光源把樣品調(diào)焦清晰；
 

　　h. 調(diào)節(jié)DIC插片，使微分干涉相襯的像達(dá)到Z佳效果，也就是浮雕效果Z為明顯；
 

　　i. 同時(shí)可調(diào)節(jié)聚光鏡的孔徑光闌，使反差的效果也達(dá)到Z佳；
 

　　j. 然后再細(xì)微調(diào)樣品的細(xì)節(jié)，可見樣品中不同層面上的結(jié)構(gòu)；
 

　　k. 如果把補(bǔ)色器（first order red retardation plate）插入，并同時(shí)調(diào)節(jié)DIC插片，可在視野中看到不斷變化的絢麗色彩，紅、橙、黃、綠、藍(lán)、紫、粉紅、粉紫及金黃色都具有。適用范圍：透明或不能染色的組織切片，厚度可達(dá)100?m左右，培養(yǎng)中的活組織和活細(xì)胞、小生生物等。
 

　　4、落射光激發(fā)的熒光法（incident-loght fluorescence Epi-FL）：
 

　　簡(jiǎn)稱為落射熒光法，是近代檢術(shù)中新發(fā)展出來(lái)的一種強(qiáng)有力的反差增強(qiáng)法。它將激發(fā)熒光用的光源改在物鏡的上方，光由物鏡上方經(jīng)反光鏡射入物鏡去激發(fā)樣品，從樣品上被激發(fā)的熒光經(jīng)物鏡成像并穿透反光鏡而由目鏡觀察。該方法較簡(jiǎn)便，效率高，50W的光源強(qiáng)度比透射熒光法的250W還強(qiáng)。熒光方法是利用波長(zhǎng)較短的紫外光、紫光、藍(lán)紫光、藍(lán)光及綠光等去激發(fā)樣品，只要樣品中含有可產(chǎn)生熒光的成分，它便吸收短波的激發(fā)光而釋放出波長(zhǎng)較長(zhǎng)的熒光。不同物質(zhì)只能吸改特定波長(zhǎng)的激發(fā)光，而釋放的熒光也會(huì)有特定的波長(zhǎng)，因而用作特異性的鑒定十分有效，如某些致病的細(xì)菌和螺旋體，受紫外光激發(fā)后能發(fā)出它們*的熒光，很容易作出鑒定，這種利用物質(zhì)吸收激發(fā)光后放出*熒光的方法稱為自發(fā)熒光法。某些物質(zhì)自身不會(huì)吸收激發(fā)光，或吸收后不能釋放熒光，但可以吸收或吸附特定的熒光色素或染料，而這些特定的熒光色素或染料也只能吸收特定的激發(fā)光，再釋放出特定的熒光，從而間接地鑒別出某種物質(zhì)，這稱為間接熒光法。上述熒光方法廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)及工業(yè)的特異性研究和鑒別上。調(diào)整方法：熒光或附有熒光部件的，調(diào)整的方法大致相同。
 

　?、?汞燈的安裝：
 

　　a. 打開包裝，取出汞燈將其小心安裝在上電極散熱帽上，安裝時(shí)注意手指不能直接接觸燈管和散熱帽的正面，汞燈的封氣口要對(duì)向散熱帽的左側(cè)或右側(cè)；
 

　　b. 把汞燈的上電極引張安裝并固定在散熱帽底面的小孔上，再把汞燈的下電極及上電極引線另一端，分別安裝在燈座上各自的插孔中并固定；
 

　　c. 鎖緊散熱片上的螺絲后，把汞燈連同燈座及散熱帽小心裝入燈室中，鎖緊相應(yīng)的螺絲，再把燈座上的連線和插座插到汞燈電源后部的插座上。
 

　　d. 詳細(xì)的安裝方法請(qǐng)參照有關(guān)說(shuō)明書。
 

　?、?汞燈燈室在外的初步調(diào)整：
 

　　a. 接通汞燈電源，讓汞燈預(yù)熱10-15min；
 

　　b. 把汞燈燈室擺放在桌面上，讓汞弧投影到2-3m外的墻上，劃一條與燈室窗口中心線對(duì)地高度一樣的水平線作為參考線；
 

　　c. 轉(zhuǎn)動(dòng)燈室調(diào)焦旋鈕，使汞弧的像清晰地投影于墻上；
 

　　d. 分別調(diào)節(jié)燈室外殼上的5個(gè)調(diào)節(jié)螺絲孔，把汞弧的像其反射像調(diào)成并排且盡量*近，但不要重疊在一起。
 

　?、?汞燈汞弧在內(nèi)位置的檢驗(yàn)：
 

　　a. 將汞燈照明光路系統(tǒng)中的視場(chǎng)光闌開到Z大；
 

　　b. 把熒光濾光片組推到藍(lán)光激發(fā)的位置上，以避免汞燈中的藍(lán)光太刺眼；
 

　　c. 把觀察的樣品或一塊載玻片放在物臺(tái)上，蓋上一張比蓋玻片稍大且潔白的薄紙；
 

　　d. 取下一個(gè)物鏡，使激發(fā)的藍(lán)光經(jīng)物鏡轉(zhuǎn)換器的空檔照在白紙上，白紙上會(huì)有一藍(lán)色的圓形照明區(qū)域，汞弧的像及其反射像都應(yīng)該出現(xiàn)在這區(qū)域的*部位，否則，可調(diào)節(jié)燈室調(diào)焦旋鈕至Z清晰，然后分別調(diào)節(jié)燈室外殼上的5個(gè)調(diào)節(jié)螺絲孔，直至汞弧的像及其反射像并排在照明區(qū)域的*位置。
 

　　e. 調(diào)好之后，把物鏡裝回去，通過(guò)目鏡可見白紙被藍(lán)光激發(fā)后發(fā)射出的黃綠色熒光；
 

　　f. 仔細(xì)調(diào)焦，可看清白紙的纖維；取去白紙，樣品上的熒光細(xì)節(jié)隱約可見而很容易調(diào)焦清晰。
 

　　④ 汞燈使用注意事項(xiàng)　目前通常使用的為50W超高氣壓汞燈，燈管內(nèi)通有一對(duì)鎢電極和液態(tài)汞（室溫下附在管壁上），未點(diǎn)燃時(shí)，管內(nèi)氣壓很低，在燈管的兩電極間施加電壓角發(fā)點(diǎn)燃后，汞氣化為汞蒸氣形成汞弧而產(chǎn)生強(qiáng)光，溫度升高，管內(nèi)氣壓迅速升到10個(gè)大氣壓。由于是高氣壓的氣體放電，必須了解其特性才能安全地使用汞燈。
 

　　a. 汞燈接通電源后需要10-15min預(yù)熱時(shí)間，汞才能充分汽化并形成汞弧，產(chǎn)生高亮度而穩(wěn)定的激發(fā)光。因此，觀察前要提早通電；
 

　　b. 汞燈在使用過(guò)程中，不要隨意開關(guān)汞燈的電源；
 

　　c. 關(guān)掉汞燈電源后，必須等待15-20min，待汞燈自燃冷卻后才可再次接通電源，違反這一操作規(guī)定時(shí)，將會(huì)造成嚴(yán)重后果！由于汞燈內(nèi)的汞蒸氣未*液化，汞蒸氣內(nèi)阻很小，一旦通電在兩電極間施加電壓，汞燈內(nèi)形成強(qiáng)大的電流，輕則燒斷保險(xiǎn)絲或燒毀汞燈電源中的扼流圈，重則汞燈爆炸，汞蒸氣彌漫整個(gè)實(shí)驗(yàn)室，造成工作人員中毒，不僅損失了汞燈，還會(huì)炸毀燈室內(nèi)的集光-聚光部件。
 

　　d. 汞燈的使用壽命一般只有300h，使用得當(dāng)可達(dá)600h，使用壽命與開關(guān)的次數(shù)成反比，應(yīng)集中一批樣呂作2-3h的觀察。汞燈價(jià)格及昂貴，應(yīng)珍惜使用。
 

　　e. 汞燈壽命終結(jié)的標(biāo)志是點(diǎn)燃困難，燈管發(fā)黑。
 

　　5、暗視野法（dark field）：
 

　　許多透明或半透明的樣品，如細(xì)菌、微生物、細(xì)胞內(nèi)的精細(xì)結(jié)構(gòu)及結(jié)晶體的內(nèi)含物等，在明視野中不容易看清楚，如果采用暗視野法就可以大大提高樣品的可視度。以暗視野法所看到的是襯托在黑暗視野背景中發(fā)亮的樣品輪廓及其細(xì)節(jié)。普遍光學(xué)的Z高分辨率為0.2μm，而暗視野雖然對(duì)樣品的細(xì)節(jié)構(gòu)造分辨不清楚，但卻可看到0.004μm以上微細(xì)顆粒的存在，即可以看到亞顯微結(jié)構(gòu)，特別適合用來(lái)觀察微細(xì)的顆粒與細(xì)菌等。調(diào)整方法：暗視野法的主要必需部件是暗視野聚光鏡。使用時(shí)須先用明視野聚光鏡把庫(kù)勒照明系統(tǒng)調(diào)整好。換上暗視野聚光鏡時(shí)，要把載玻片（樣品）移開，將浸沒油滴在聚光鏡頂部，再把樣品載玻片擱在物臺(tái)上，浸沒油便充填在兩者之間，這種聚光鏡須與裝有可變光闌的100×油鏡配用。另一種中倍率干式暗視野聚光鏡可與中倍率的物鏡配用，這種聚光鏡具有*光擋，照明光只能透過(guò)光檔與聚光鏡邊緣之間的透光環(huán)才能進(jìn)入聚光鏡內(nèi)。對(duì)于配備齊全的相差，與編號(hào)為Ph3物鏡配用的相差聚光鏡相差環(huán)，可以和 10×及10×以下的相差物鏡配用而形成低倍率的暗視野效果。