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新品上市|核酸質(zhì)譜預(yù)處理試劑UNG體系
閱讀:170發(fā)布時(shí)間:2023-7-21
PCR檢測(cè)因其高靈敏度、快速、操作便捷等優(yōu)勢(shì)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用,不過(guò)正是由于它靈敏度極-高,少量的外源DNA污染即可與目的模板一起擴(kuò)增,從而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性。污染很容易發(fā)生,比如模板交叉污染、PCR試劑污染、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染(主要以氣溶膠形式污染)以及實(shí)驗(yàn)室克隆質(zhì)粒污染等,這幾種情況中最-為嚴(yán)重的是擴(kuò)增產(chǎn)物污染。為保證PCR結(jié)果的準(zhǔn)確性,我們會(huì)引入U(xiǎn)NG(也稱為UDG,Uracil-DNA Glycocasylase,以下簡(jiǎn)稱為UNG酶)酶防污染體系。
UNG(Uracil-DNA Glycosylase)是一種酶,其作用是識(shí)別和修復(fù)DNA中的尿-嘧-啶(U)殘基。UNG主要參與DNA修復(fù)過(guò)程中的堿基切除修復(fù)機(jī)制。
PCR反應(yīng)前,在一定條件下,UNG酶催化水解含有dU-DNA鏈中的尿-嘧-啶堿基和糖磷酸骨架的N-糖苷鍵,產(chǎn)生的缺嘧啶位點(diǎn),釋放游離尿-嘧-啶。然后進(jìn)行熱處理,使UNG酶失活。同時(shí),高溫使得缺嘧啶位點(diǎn)的磷酸骨架極易水解斷裂,從而消除含有尿-嘧-啶的PCR產(chǎn)物的污染(如下圖所示)。
飛行時(shí)間質(zhì)譜分析系統(tǒng)核酸樣本預(yù)處理試劑GR(含UNG)(貨號(hào):T400301)是一款具有強(qiáng)防污染能力、高質(zhì)譜兼容性的試劑產(chǎn)品,由UNG酶體系、多重PCR反應(yīng)體系、去磷酸反應(yīng)體系和單堿基延伸反應(yīng)體系等組成。該產(chǎn)品基于核酸質(zhì)譜平臺(tái)可對(duì)多種類型DNA樣本的核酸預(yù)處理,并能高效應(yīng)用于藥物基因組學(xué)研究、遺傳病診斷、病原體檢測(cè)等領(lǐng)域,滿足不同的研究需求。
本產(chǎn)品運(yùn)用dUTP-UNG防污染系統(tǒng),可有效去除PCR產(chǎn)物的殘留污染,大大降低了由于擴(kuò)增產(chǎn)物污染而導(dǎo)致的假陽(yáng)性。UNG酶在PCR循環(huán)中的預(yù)變性步驟即可被滅活,因此不會(huì)影響新的PCR產(chǎn)物的形成。該產(chǎn)品為飛行時(shí)間質(zhì)譜分析系統(tǒng)的核酸樣本預(yù)處理提供了高效、可靠的解決方案,減少假陽(yáng)性發(fā)生率,保證質(zhì)譜分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
圖1. UNG酶體系對(duì)100 ng含dU DNA底物和不含dU DNA底物的消化情況電泳結(jié)果圖
UNG酶體系在經(jīng)過(guò)50℃ 10 min孵育后,含dU的DNA底物組的PCR條帶基本消除,而不含dU的DNA底物組條帶亮明亮。我們的UNG酶體系能夠有效降解含dU的DNA底物。
2.能夠顯著降低核酸質(zhì)譜的污染風(fēng)險(xiǎn)
圖2. UNG-PCR體系與普通PCR體系對(duì)某SNP Panel污染去除能力測(cè)試的質(zhì)譜結(jié)果對(duì)比圖
UNG-PCR體系與普通PCR體系對(duì)某SNP Pane測(cè)試的結(jié)果相比,UNG-PCR體系能明顯降低dU DNA帶來(lái)的污染。我們的UNG酶體系在核酸質(zhì)譜法中能夠顯著降低核酸質(zhì)譜的污染風(fēng)險(xiǎn),充分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)驗(yàn)證污染去除率可達(dá)95%。
圖3. UNG酶體系、無(wú)UNG酶體系對(duì)同一樣本擴(kuò)增后的電泳結(jié)果圖
UNG酶體系在經(jīng)過(guò)50℃ 10 min孵育后再進(jìn)行PCR反應(yīng),未出現(xiàn)明顯條帶亮度減弱、未出現(xiàn)明顯雜帶。我們的UNG酶體系能夠保持PCR產(chǎn)物的完整性。
4.能夠保持核酸質(zhì)譜檢測(cè)的正確性
圖4. UNG-PCR體系與普通PCR體系對(duì)某SNP Panel測(cè)試的質(zhì)譜結(jié)果對(duì)比圖
UNG-PCR體系與普通PCR體系對(duì)某SNP Panel測(cè)試的結(jié)果相當(dāng),基因型一致且評(píng)分未出現(xiàn)明顯差距。我們的UNG酶體系能夠保持核酸質(zhì)譜檢測(cè)的正確性。
杭州聚致生物科技有限公司(簡(jiǎn)稱“聚致生物")創(chuàng)立于2021年,總部位于浙江杭州,是中-國(guó)-領(lǐng)-先的分析儀器公司——聚光科技集團(tuán)的成員企業(yè),專注于生物質(zhì)譜類儀器產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和推廣,致力于以質(zhì)譜技術(shù)推動(dòng)生命科學(xué)研究和產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,共建良好的產(chǎn)業(yè)生態(tài)。聚致生物定位于上游儀器平臺(tái)供應(yīng)商,以開(kāi)放的態(tài)度同生命科學(xué)領(lǐng)域的專業(yè)機(jī)構(gòu)合作,共同培育終端應(yīng)用市場(chǎng),造福人類的美好生活。
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