1. 前期準(zhǔn)備
- 實驗材料：獲取神經(jīng)干細(xì)胞（如從胚胎腦組織分離）、微重力模擬裝置、神經(jīng)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基（含 B27 添加劑、EGF、bFGF 的 DMEM/F12 培養(yǎng)基）、多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)容器、無菌器械等。
- 設(shè)備準(zhǔn)備：與腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)類似，調(diào)試賽奧維度CellSpace-3D微重力三維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，確保溫度、氣體環(huán)境適宜。
2. 細(xì)胞分離與接種
- 細(xì)胞分離：解剖獲取胚胎腦組織，在無菌條件下剪碎，用消化后，通過機械吹打制成單細(xì)胞懸液，過濾去除組織塊，離心收集細(xì)胞。
- 接種：將神經(jīng)干細(xì)胞以 2 - 3×10? 個/mL 的密度接種到微重力培養(yǎng)裝置中，因神經(jīng)干細(xì)胞易貼壁，包被多聚賴氨酸可促進(jìn)貼壁。
3. 培養(yǎng)過程
- 每 2 - 3 天添加適量新鮮培養(yǎng)基，維持營養(yǎng)成分。觀察細(xì)胞神經(jīng)球形成情況，神經(jīng)球直徑達(dá)到一定大小時，可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
- 采用免疫熒光技術(shù)檢測神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物（如 Nestin）的表達(dá)，以鑒定細(xì)胞特性。
4. 誘導(dǎo)分化：培養(yǎng)一定時間后，可更換為含血清的分化培養(yǎng)基，在微重力環(huán)境下誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞等分化，通過免疫細(xì)胞化學(xué)檢測相應(yīng)細(xì)胞標(biāo)志物（如 β - Tubulin III 用于神經(jīng)元，GFAP 用于星形膠質(zhì)細(xì)胞）評估分化效果。
