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貨號(hào)	FS-X9633

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100μl

貨號(hào)：FS-X9633

產(chǎn)品介紹:

本品是溶于DMSO的CCCP溶液，濃度為50mM，體積為100μl（相當(dāng)于1mg的總量），常用作一種陽(yáng)性對(duì)照來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并配合線粒體膜電位檢測(cè)探針JC-1或者JC-10來(lái)進(jìn)行相關(guān)研究。

CCCP，即Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone，一種質(zhì)子載體（H+ ionophore），是一種強(qiáng)效的線粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑，促使線粒體內(nèi)膜對(duì)H+產(chǎn)生通透性，導(dǎo)致線粒體內(nèi)膜兩側(cè)的膜電位喪失，誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。也可作用于葉綠體膜，抑制光合作用；CCCP還可抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體（ER-Golgi）之間的蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)，高親和力結(jié)合細(xì)胞色素氧化酶。

CCCP還具有其他功能：

1）在牛蛙交感神經(jīng)方面的實(shí)驗(yàn)表明，CCCP 可增強(qiáng)促黃體生成素釋放激素的釋放；

2）作為一種質(zhì)子導(dǎo)體在葡萄糖存在的情況下影響E.coli 細(xì)胞活性；

3）對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣水平的各種調(diào)節(jié)效應(yīng)；

4）抑制脂肝酶的分泌；

5）部分抑制pH梯度活化的Cl-攝取以及刷狀緣膜的Cl-/Cl-交換等。

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期12個(gè)月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激mei2(ERK2)檢測(cè)試劑盒 forExtracellularSignalRegulatedKinase2(ERK2)

核因子κB受體激活因子配基(RANκL)檢測(cè)試劑盒 forReceptorActivatorOfNuclearFactorKappaBLigand(RANkL)

RAD51同源物(RAD51)檢測(cè)試劑盒 forRAD51Homolog(RAD51)

組an-N-jia基轉(zhuǎn)移mei(HNMT)檢測(cè)試劑盒 forHistamine-N-Methyltransferase(HNMT)

唾液suan轉(zhuǎn)移mei7E(SIAT7E)檢測(cè)試劑盒 forSialyltransferase7E(SIAT7E)

血小板激活因子乙酰水解mei2(PAFAH2)檢測(cè)試劑盒 forPlateletActivatingFactorAcetylhydrolase2(PAFAH2)

巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)檢測(cè)試劑盒 forMacrophageMigrationInhibitoryFactor(MIF)

jia基多巴1α(MEP1α)檢測(cè)試劑盒 forMeprinAAlpha(MEP1a)

腫瘤壞死因子受體超家族成員1A(TNFRSF1A)檢測(cè)試劑盒 forTumorNecrosisFactorReceptorSuperfamily,Member1A(TNFRSF1A)

促生長(zhǎng)激su釋放激su(GHRH)檢測(cè)試劑盒 forGrowthHormoneReleasingHormone(GHRH)

分泌型卷曲相關(guān)蛋白5(SFRP5)檢測(cè)試劑盒 forSecretedFrizzledRelatedProtein5(SFRP5)

矢車菊δ2(CENTδ2)檢測(cè)試劑盒 forCentaurinDelta2(CENTd2)

突觸囊泡蛋白Ⅻ(SYT12)檢測(cè)試劑盒 forSynaptotagminXII(SYT12)

Ⅰ型膠原α2(COL1α2)檢測(cè)試劑盒 forCollagenTypeIAlpha2(COL1a2)

蛋白二硫鍵異構(gòu)mei(PDI)檢測(cè)試劑盒 forProteinDisulfideIsomerase(PDI)

氨基端前腦鈉su(NT-ProBNP)檢測(cè)試劑盒 forN-TerminalProBrainNatriureticPeptide(NT-ProBNP)

ben丙氨suan羥化mei(PAH)檢測(cè)試劑盒 forPhenylalanineHydroxylase(PAH)
CCCP(50mM) 細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑jia基多巴標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Methyldopa

芐星青霉su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Penicillin G Benzathine

鹽suan賽庚啶標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Cyproheptadine Hydrochloride

度suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:400mg 英文名稱：Etodolac

泰諾福韋雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:10mg 英文名稱：

地丹諾辛相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

黃豆黃su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:15mg 英文名稱：Glycitein

乙氧酰anbenjia酯相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：Ethopabate Related Compound A

舒芬標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Suprofen

硬脂富馬suan鈉標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Sodium Stearyl Fumarate

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