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貨號	FS-X9609

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：細(xì)胞活力(活死細(xì)胞染色)檢測試劑盒

英文名稱：Live & Dead Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Cells

產(chǎn)品規(guī)格：1000T

貨號：FS-X9609

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒為動物細(xì)胞死活檢測提供了雙色熒光染色方法。本試劑盒采用兩種廣泛常用的熒光探針，通過檢測細(xì)胞內(nèi)酯酶活性和質(zhì)膜完整性兩個方面反映細(xì)胞活力。本試劑盒適用于熒光顯微鏡、熒光多孔板、掃描儀、流式細(xì)胞儀以及其他熒光檢測系統(tǒng)。本試劑盒可以應(yīng)用于大多數(shù)的真核哺乳動物細(xì)胞，包括貼壁細(xì)胞核某些組織，但不適用與細(xì)菌、酵母。該方法更快捷安全且靈敏度更高。

原理：在鈣黃素AM 存在活細(xì)胞內(nèi)時，其特點就是由于胞內(nèi)的酯酶活性作用，由幾乎無熒光、具有細(xì)胞膜透性的鈣黃素AM生成具有強烈熒光信號的綠色熒光物質(zhì)（Ex/Em：495nm/520nm）。而對于受損的細(xì)胞膜來說，碘化丙啶(PI)可以傳過進(jìn)入細(xì)胞，與核酸結(jié)合，熒光信號從而放大40 倍，產(chǎn)生一個明亮的紅色熒光信號的死細(xì)胞（Ex/Em：530nm/620nm）。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

心營養(yǎng)su樣細(xì)胞因子1(CLCF1)elisa檢測試劑盒英文名稱：CLCF1 ELISA Kit，CLCF1，

腺suan環(huán)化mei2(ADCY2)elisa檢測試劑盒英文名稱：ADCY2 ELISA Kit，ADCY2，

纖溶mei(Fbn)elisa檢測試劑盒英文名稱：Fbn ELISA Kit，F(xiàn)bn，

細(xì)胞色suP450家族成員3A4(CYP3A4)elisa檢測試劑盒英文名稱：CYP3A4 ELISA Kit，CYP3A4，

無羊膜蛋白(AMN)elisa檢測試劑盒英文名稱：AMN ELISA Kit，AMN，

圍脂滴蛋白3(PLIN3)elisa檢測試劑盒英文名稱：PLIN3 ELISA Kit，PLIN3，

外生骨疣蛋白2(EXT2)elisa檢測試劑盒英文名稱：EXT2 ELISA Kit，EXT2，

唾液富組蛋白3(HTN3)elisa檢測試劑盒英文名稱：HTN3 ELISA Kit，HTN3，

1,3-βD葡葡糖mei(1,3-βD-Glu)elisa檢測試劑盒英文名稱：1,3-βD-Glu ELISA Kit，1,3-βD-Glu，

白細(xì)胞介su1β(IL-1β)elisa檢測試劑盒英文名稱：IL-1β ELISA Kit，IL-1β，

粒細(xì)胞趨化蛋白2(GCP-2/CXCL6)elisa檢測試劑盒英文名稱：GCP-2/CXCL6 ELISA Kit，GCP-2/CXCL6，

組織蛋白meiK(CTSK)elisa檢測試劑盒英文名稱：CTSK ELISA Kit，CTSK，

轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)elisa檢測試劑盒英文名稱：TFR2 ELISA Kit，TFR2，

軸突蛋白2(NRXN2)elisa檢測試劑盒英文名稱：NRXN2 ELISA Kit，NRXN2，

酯meiD(ESD)elisa檢測試劑盒英文名稱：ESD ELISA Kit，ESD，

整合suαV(ITGαV)elisa檢測試劑盒英文名稱：ITGαV ELISA Kit，ITGαV，

增殖關(guān)聯(lián)蛋白2G4(PA2G4)elisa檢測試劑盒英文名稱：PA2G4 ELISA Kit，PA2G4，
細(xì)胞活力(活死細(xì)胞染色)檢測試劑盒恩比興標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：

鹽suan倍他si汀標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Betahistine Hydrochloride

索他爾相關(guān)化合物A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：

硬脂suan鎂標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:5g 英文名稱：Magnesium Stearate (AS)

蒜氨suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：Alliin

安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Acesulfame Potassium

lv己定標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Chlorhexidine

lv己定相關(guān)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：

萘磺suan左丙氧芬標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:300mg 英文名稱：Levopropoxyphene Napsylate

氨benjiasuan鈉標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Aminobenzoate Sodium
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)