細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：小鼠骨髓瘤細胞    

產(chǎn)品英文：Sp2/0

貨號：FS-01X9693

細胞培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%P/S

生長狀態(tài)：懸浮+貼壁（少量）生長

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

人非神經(jīng)元性烯化(NNE)ELISA試劑盒 Human non-neuronal enolase,NNE ELISA Kit

人多巴-β羥化(DBH)ELISA試劑盒 Human dopamine-β-hydroxylase,DBH ELISA Kit

人乙酰化(CHAc)ELISA試劑盒 Human choline acetylase,CHAc ELISA Kit

人異檸檬脫氫(ICD)ELISA試劑盒 Human isocitrate dehydrogenase,ICD ELISA Kit

原Ⅱ(Try-Ⅱ)ELISA試劑盒 Human Trypsinogen-2,Try-ⅡELISA Kit

人腺脫(ADA)ELISA試劑盒 Human adenosine deaminase,ADA ELISA Kit

人天基轉(zhuǎn)移(AST)ELISA試劑盒 Human Aspartate aminotransferase,AST ELISA Kit

人葡萄糖6磷異構(gòu)(GPI)ELISA試劑盒 Human glucose-6-phosphate isomerase,GPI ELISA Kit

人磷葡萄糖變位(PGM)ELISA試劑盒 Human Phosphoglucomutase,PGM ELISA Kit

人亮?；?/span>(LAP)ELISA試劑盒 Human Leucine aminopepridase,LAP ELISA Kit

人鏈激(SK)ELISA試劑盒 Human Streptokinase,SK ELISA Kit

人核糖核(RNASE)ELISA試劑盒 Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit

人過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物(LPO)ELISA試劑盒 Human lipid peroxlde,LPO ELISA Kit

人對氧磷(PON)ELISA試劑盒 Human paraoxonase,PON ELISA Kit

人丙激(PK)ELISA試劑盒 Human pyruvate kinase,PK ELISA Kit

人β半乳糖(βGAL)ELISA試劑盒 Human α-galactosidase,αGAL ELISA Kit

人αL艾杜糖(IDUA)ELISA試劑盒 Human α-L-iduronidase,IDUA ELISA Kit

人α2抗纖溶(α2-AP)ELISA試劑盒 Human α2-Antiplasmin,α2-AP ELISA Kit

人N-乙酰-β-D-基葡萄糖(NAG)ELISA試劑盒Human N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit
小鼠骨髓瘤細胞NBL1/DAND1  神經(jīng)母細胞瘤抑瘤蛋白1抗體規(guī)格: 0.1ml

DLL4/Delta 4  Notch信號通路Delta樣配體4抗體規(guī)格: 0.1ml

DPP2  溶體蛋白DPP2抗體規(guī)格: 0.1ml

FSTL1/FRP  卵泡相關(guān)蛋白1規(guī)格: 0.1ml

HPGD/PGDH1/Prostaglandin dehydrogenase 1  前列腺脫氫1抗體規(guī)格: 0.1ml

HPRG/HRG  組富含糖蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

Hemopexin/HPX  糖蛋白β-1B抗體規(guī)格: 0.1ml

LRPAP1/MRAP  脂蛋白受體相關(guān)蛋白抗體（低密度脂蛋白相關(guān)蛋白的相關(guān)蛋白1）規(guī)格: 0.1ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。