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睪丸支持細胞

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更新時間:2022-04-18 13:19:52瀏覽次數(shù):146次

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適用領(lǐng)域 科研 貨號 FS-01X9838
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98.jpg
產(chǎn)品屬于:

產(chǎn)品名稱:睪丸支持細胞    

產(chǎn)品規(guī)格:5×105

貨號:FS-01X9838

產(chǎn)品類型:原代細胞

單位:T25/瓶

提供細胞鑒定:提供免疫熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度(℃):37

運輸溫度(℃):常溫

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。

二.細胞處理:

1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項:

1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。

2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。

3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。

4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。

6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。

7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大鼠過氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Peroxisome Proliferator-activated receptor γ,PPAR-γ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠環(huán)孢A(CsA)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Cyclosporine A,CsA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒英文名稱:Rat high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA試劑盒英文名稱:Rat β2-glycoprotein 1 antibody IgA/G/M,β2-GP1 IgA/G/M ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Endometrium Antibody,EMAb ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)ELISA試劑盒英文名稱:Rat LDL-IC ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠15脂加氧(15-LO/LOX)ELISA試劑盒英文名稱:Rat 15-lipoxygenase,15-LO/LOX ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Troponin Ⅰ,Tn-Ⅰ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Serum amyloid A,SAA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Haptoglobin,Hpt/HP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠α1性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒英文名稱:Rat α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Endothelial nitric oxide synthase 3,eNOS-3 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒英文名稱:Rat cholest erolester transfer protein,CETP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠血管緊張原(aGT)ELISA試劑盒英文名稱:Rat cholest erolester transfer protein,CETP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒英文名稱:Rat heat shock protein 60,hSP-60 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠丙二醛(MDA)ELISA試劑盒英文名稱:Rat malondialchehyche,MDA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠超氧化物歧化(SOD)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Super Oxidase Dimutase,SOD ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

大鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Heat Shock Protein glycoprotein 96,HSP gp96 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
睪丸支持細胞CIDE B  DNA斷裂因子相似蛋白B抗體規(guī)格: 0.2ml

DNase I  脫氧核糖核1抗體規(guī)格: 0.2ml

DNase II  脫氧核糖核2抗體規(guī)格: 0.2ml

DNase gamma  脫氧核糖核γ抗體規(guī)格: 0.2ml

TIP30  TIP30蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

AMID/AIFM2  線粒體凋亡誘導(dǎo)因子2抗體規(guī)格: 0.2ml

ATAD5  染色體脆弱性相關(guān)基因抗體規(guī)格: 0.2ml

BAT3/BAG6  Bcl2相關(guān)抗凋亡基因6抗體規(guī)格: 0.2ml

 

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