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貨號(hào)	FS-X9527

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒（MTT法）

英文名稱：MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：500次

貨號(hào)：FS-X9527

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè)。MTT可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié) 晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan。在特定溶劑存在的情況下，可以被*溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測(cè)定570nm波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。

本試劑盒采用了*的Formazan溶解液配方，無需去除原有的培養(yǎng)液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。從而避免了由于去除培養(yǎng)液時(shí)formazan被部分去除而引起的誤差。本試劑盒本底低，靈敏度高，線性范圍寬，使用方便。

試劑盒組份：

MTT——————25mg

MTT溶劑——————5ml

Formazan溶解液——55ml

儲(chǔ)存條件：4℃，有效期一年。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

抑制素βE(INHβE)檢測(cè)試劑盒 forInhibinBetaE(INHbE)

抗原提呈關(guān)聯(lián)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TAP)檢測(cè)試劑盒 forTransporterAssociatedWithAntigenProcessing(TAP)

血管內(nèi)皮生長因子C(VEGFC)檢測(cè)試劑盒 forVascularEndothelialGrowthFactorC(VEGFC)

Syncollin蛋白(SYCN)檢測(cè)試劑盒 forSyncollin(SYCN)

二酰甘油-O-酰基轉(zhuǎn)移酶同源物1(DGAT1)檢測(cè)試劑盒 forDiacylglycerol-O-AcyltransferaseHomolog1(DGAT1)

神經(jīng)介素B(NMB)檢測(cè)試劑盒 forNeuromedinB(NMB)

原肌球調(diào)節(jié)蛋白3(TMOD3)檢測(cè)試劑盒 forTropomodulin3(TMOD3)

嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子4(NCF4)檢測(cè)試劑盒 forNeutrophilCytosolicFactor4(NCF4)

顆粒酶M(GZMM)檢測(cè)試劑盒 forGranzymeM(GZMM)

N-乙酰神經(jīng)氨酰酸合酶(NANS)檢測(cè)試劑盒 forN-AcetylneuraminicAcidSynthase(NANS)

抑絲蛋白3(PFN3)檢測(cè)試劑盒 forProfilin3(PFN3)

白介素22(IL22)檢測(cè)試劑盒 forInterleukin22(IL22)

細(xì)胞色素P450家族成員2E1(CYP2E1)檢測(cè)試劑盒 forCytochromeP4502E1(CYP2E1)

四旋蛋白6(TSPAN6)檢測(cè)試劑盒 forTetraspanin6(TSPAN6)

細(xì)胞周期素D1(CCND1)檢測(cè)試劑盒 forCyclinD1(CCND1)

白介素1α(IL1α)檢測(cè)試劑盒 forInterleukin1Alpha(IL1a)

乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒 forLactateDehydrogenase(LDH)
細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒（MTT法）睪內(nèi)酯酮標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:125mg 英文名稱：Testolactone CIII

醋磺環(huán)已脲標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱：Acetohexamide

利司他標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Orlistat

非地平相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:15mg 英文名稱：

氯氮草相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

二羥基丙酮標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱：Dihydroxyacetone

氨基丁醇標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Aminobutanol

磺丙脲標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Chlorpropamide

刺五加甙E標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:15mg 英文名稱：Eleutheroside E

鹽酸索他爾標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:300mg 英文名稱：Sotalol Hydrochloride
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)