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貨號	BJ-X96992

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產(chǎn)品名稱	雞卵泡顆粒細胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號	BJ-X96992

商品屬性：

名稱 雞卵泡顆粒細胞

2.組織來源：雞卵泡組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

雞卵泡顆粒細胞分離自雞卵泡組織；成熟卵泡是卵巢的組織結(jié)構(gòu)成分之一，卵泡腔很大，卵丘很明顯。卵泡內(nèi)膜細胞緊靠卵泡顆粒層，與顆粒層細胞之間有一層基膜相隔，內(nèi)膜細胞呈多邊形，胞質(zhì)清亮，胞核圓形，細胞間可見許多毛細血管，外膜細胞位于最外層，多呈梭形，與周圍結(jié)締組織分界不明顯。卵泡（follicle）中卵母細胞四周有一層菱形或扁平細胞圍繞，在卵泡開始發(fā)育、卵細胞成長的同時，周圍的菱形細胞變?yōu)榱⒎叫危⒂蓡螌釉錾蓮?fù)層，因其細胞漿內(nèi)含有顆粒，故稱為顆粒細胞。初級卵泡的顆粒細胞為單層；次級卵泡的顆粒細胞增至復(fù)層；成熟卵泡的顆粒細胞展開又變?yōu)閱螌?。顆粒細胞的胞核大而圓，著色深，細胞的游離面有許多細長突起伸入放射帶的凹陷部。

5.方法簡介：

()實驗室分離的雞卵泡顆粒細胞采用先機械分離后膠原酶-聯(lián)合消化法、并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實驗室分離的雞卵泡顆粒細胞經(jīng)FSHR免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-C001

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)上皮細胞樣

傳代特性可傳1代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人 PRLR / Prolactin Receptor ELISA配對抗體

人 MMP-9 / CLG4B / MMP9 ELISA配對抗體

人 CEACAM1 / CD66a ELISA配對抗體

人 IL20RA / IL20R1 ELISA配對抗體

人 Hemopexin / HPX ELISA配對抗體

人 TrkA / NTRK1 ELISA配對抗體

人 CD146 / MCAM / MUC18 ELISA配對抗體

人 TIMP1 / EPA / CLGI ELISA配對抗體

人 IL12B / N

雞卵泡顆粒細胞Goose Parvovirus(GPV)鵝細小病毒LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周APOL6 載脂蛋白樣蛋白6抗體規(guī)格: 0.2ml

Spiroplasma citri柑橘頑固病螺原體PCR試劑盒植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周phospho-GATA1(ser142) 磷酸化珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體規(guī)格: 0.1ml

Herba lycopodii伸筋草PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周Layilin 透明質(zhì)酸受體抗體規(guī)格: 0.1ml

Nocardia carnea肉色諾卡LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周VRK1 牛痘毒相關(guān)激1抗體（絲/蘇蛋白激VRK1）規(guī)格: 0.2ml

Treponema hyodysenteriae豬痢疾密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周SULT1A1 芳基磺基轉(zhuǎn)移1抗體規(guī)格: 0.2ml

Radix et rhizoma rhei大黃探針法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周Dynamin 2 動力蛋白2抗體規(guī)格: 0.1ml

Infectious Myonecrosis Virus(IMNV)傳染性肌肉壞死病病毒RT-LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 1-2周DNAI1/Dynein intermediate chain 1 軸絲中鏈動力蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Torque Teno Sus Virus(TTSuV)豬托克特諾病毒（豬細環(huán)病毒）探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周phospho-ODF2(Ser796) 磷酸化子尾部結(jié)構(gòu)蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

Rhizoma et radix notopterygii羌活LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周TPST1 酪蛋白硫酸轉(zhuǎn)移1抗體規(guī)格: 0.2ml

Herpesvirus Saimiri(HVS)松鼠猴皰疹病毒LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Histone H4 組蛋白H4抗體規(guī)格: 0.1ml

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。