商品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品分類 | 規(guī)格 | 貨號 |
ssDNA/RNA環(huán)化連接酶 | 克隆相關(guān) | 2000U 20KU | BJ-PJ6645 |
描述： ssDNA/RNA CircLigase 為熱穩(wěn)定的 DNA/RNA 連接 酶，不依賴于 ATP，可催化單鏈 DNA 或單鏈 RNA 的分子內(nèi) 環(huán)化。環(huán)化反應(yīng)中，要求催化底物單鏈 DNA/RNA 具有 5’- 磷酸基團和 3’-OH 基團。對于大于 15nt 的單鏈底物，該酶 都能高效的連接。
組分
活性定義：65°C 1h 條件下，催化 1pmol 5’-磷酸化的 ssDNA
底物環(huán)化，所需的酶量定義為 1Unit。
儲存：-20℃可保存 3 年。
反應(yīng)實例
1. 按以下組分配制反應(yīng)液
CircLigase (100 U/μl) 1 μl
5’磷酸化 ssDNA/RNA 10-100 pmol
10×CircLigase Buffer 2 μl
50mM MnCl2 1 μl
ddH2O Up to 20 ul
65°C 孵育 1h 進行環(huán)化反應(yīng)。
2. 失活反應(yīng)
反應(yīng)結(jié)束后，可加入終濃度 10mM EDTA 終止反應(yīng)?；虿捎?br data-filtered="filtered" style="box-sizing: border-box; margin: 0px;"/>加熱方式 85℃ 10min 加熱失活。
使用注意事項：
(1) 環(huán)化底物 ssDNA 或 RNA 必須帶有 5’磷酸基團，3’端含有 OH。
(2) 環(huán)化體系中的 ATP 濃度高于 20μM 以上時會極大抑制環(huán)化效率，甚至導致環(huán)化失敗。因此建議底物為純化產(chǎn)物。
(3) 由于本酶提高了耐熱性，在 65℃條件下進行連接反應(yīng)，在測試中 Betain 無益于連接效率提升。
(4) 本酶主要進行分子內(nèi)環(huán)化連接，分子間的連接未檢測到。
(5) 本酶對 ssDNA 和 RNA 的環(huán)化效率高，多數(shù)情況下，90%以上的底物被環(huán)化。未被環(huán)化的 ssDNA 可通過加入 5U的 Exonuclease I，37°C 消化 15min 去除，以獲得高純度的環(huán)化 ssDNA。未環(huán)化的 ssRNA，將稍后給出去除方案。
(6) 本酶可以連接 15nt 以上的核苷酸，更長的產(chǎn)物連接參數(shù)，將稍后給出測試報告及 protocol。
(7) 對于連接底物量較少的實驗來講，推薦縮小體系，而不是減少酶的用量。在小體系實驗時注意體系的蒸發(fā)，可加入礦物油以防止蒸發(fā)。
下列是公司正在出售的產(chǎn)品：
鋅指蛋白430抗體 英文名；ZNF430 | 纖維母細胞生長因子受體底物3抗體 英文名；FGFR substrate 3 |
白介素1β/IL-1β抗體 英文名；IL-1 Beta | TWIST蛋白抗體 英文名；TWIST |
DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體 | 淋巴組織表達受體蛋白樣蛋白2抗體 |
磷酸化剪接因子1抗體 英文名；phospho-SF1 (Ser82) | AU5 tag標簽抗體 |
DGCR2蛋白抗體 英文名；DGCR2 | 酪啡肽β/?-casomorphin抗體 英文名；YPFVEPI |
吸引素抗體 英文名；Attractin | Attractin蛋白抗體 英文名；Attractin |
RNA結(jié)合蛋白33抗體 英文名；RBM33 | 碳水化合物磺基轉(zhuǎn)移酶13抗體 英文名；CHST13 |
金屬離子轉(zhuǎn)運體1抗體 | PerCP標記人CD14單克隆抗體 英文名；human CD14/PerCP |
AF647標記的轉(zhuǎn)錄因子Pax6抗體 | 肌微管素相關(guān)蛋白3抗體 |
膠原樣蛋白抗體 英文名；COL20A1 | 20號染色體開放閱讀框177抗體 |
AF647標記的腫瘤壞死因子抗體 英文名；TNF alpha, Alexa Fluor 647 conjugated | 肌動蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子SMARCD3蛋白抗體 英文名；SMARCD3 |
線粒體核糖體蛋白S10抗體 | 20號染色體開放閱讀框173抗體 英文名；C20orf173 |
鋅指蛋白676抗體 | ssDNA/RNA環(huán)化連接酶磷酸化上皮鈉通道β2抗體 |
