產(chǎn)品介紹:
UNC2025是一高效、具的雙重Mer/Flt3抑制劑,對(duì)Mer和Flt3的IC50值分別為0.8nM和0.74nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1429881-91-3 純度:99.96% 分子量:476.66 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:Mer/Flt3抑制劑(UNC2025)
英文名稱:UNC2025
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10742
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
腸桿菌屬人類皰疹病8抗原Anti-FLT3 Antibody人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)
侵染鏈格孢缺氧誘導(dǎo)因子1α 多肽Anti-FLT4 Antibody人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)
弗雷曲霉組蛋白H3樣蛋白多肽Anti-FMN2 Antibody人P53(P53)
果生鏈核盤菌組蛋白H3樣蛋白(C端多肽)Anti-FLT3 Antibody人P53(P53)
葡萄座腔菌組蛋白H3樣蛋白(N端多肽)Anti-FNTB Antibody人周期D3(Cyclin-D3)
釀酒酵母艾滋病病-1/人類免疫缺陷病1型(抗原)Anti-FOLH1 Antibody人周期D3(Cyclin-D3)
哈茨木霉艾滋病病-1/人類免疫缺陷病1型(抗原)Anti-FN1 Antibody人周期D2(Cyclin-D2)ELISA
產(chǎn)克雷伯氏菌麻疹病紅血球凝集蛋白多肽Anti-FOLR1 Antibody人周期D2(Cyclin-D2)ELISA
玉黑粉菌麻疹病紅血球凝集蛋白多肽Anti-FOS Antibody人周期D1(Cyclin-D1)
突孢毛殼荷爾蒙敏感脂肪(抗原)Anti-FOXB2 Antibody人周期D1(Cyclin-D1)
多粘類芽胞桿菌熱休克蛋白-27(抗原)Anti-FOXD3 Antibody人內(nèi)皮抑(ES)
釀酒酵母熱休克蛋白90α(抗原)Anti-FOXD4L1 Antibody人內(nèi)皮抑(ES)
枯草芽孢桿菌熱休克蛋白-90β (抗原)Anti-FOXC1 Antibody人鐵蛋白(FE)
阪崎腸桿菌腫瘤凋亡ASPP家族的另一個(gè)成員(抗原)Anti-FOXD4 Antibody人鐵蛋白(FE)
*芽胞桿菌(Bacillus atrophaeus)ATCC 9372;(曾用名:枯草芽胞桿菌黑色變種)間粘附分子-1Anti-FOXD4L6 Antibody人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)
核盤菌白介1β(白介-1β)(多肽抗原)Anti-FOXE1 Antibody人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)
可溶性附著蛋白α-SNAP抗體豬霍亂沙門氏菌豬霍亂亞種綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸癌細(xì)胞
肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子激活抑制蛋白2抗體停乳鏈球菌小鼠肝癌細(xì)胞
分泌和跨膜蛋白1抗體綠膿假單胞菌(綠膿桿菌)人成骨肉瘤細(xì)胞
生成相關(guān)蛋白3抗體雅致放射毛霉=葡匐放射毛霉人卵巢顆粒細(xì)胞瘤
Mer/Flt3抑制劑(UNC2025)肺形側(cè)耳 2-噻吩Q熱
泡盛曲霉 2-甲Q熱抗體
大腸埃希氏 2-溴溴芐朊病
糞纖維單胞 3--4-氟苯甲熱衣原體
枯草芽孢桿 3-氨基-4-羔羊痢疾
短乳桿 2-溴-3-大腸桿病
紅球 (1S,2R)-(+)-反-2-苯基-1-環(huán)己傳染性角膜結(jié)膜炎
生癌腸桿 2-氟二苯甲酮巴氏桿病
炭角* 2,2'-雙(三氟甲基)二氨基聯(lián)苯口瘡抗體
乳明串珠 2,2'-雙(三氟甲基)二氨基聯(lián)苯布魯病
偏腫栓孔 環(huán)戊甲甲狀旁腺相關(guān)蛋白
細(xì)鏈格孢 1-辛烯-3-兒茶
根霉 醋鈀5羥色
害艾美耳球蟲(chóng) 四丁基氫化鈣離子
粉紅聚端孢 異麥芽三糖副結(jié)核分枝桿