Aurora A和Aurora B抑制劑(ZM447439)正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：eNOS(Human Endothelial nitric oxide synthase) ELISA Kit 人內(nèi)皮型一氧化氮合成CBZ-D-谷氨α-芐酯 98%
HO-1(Human heme oxygenase 1) ELISA Kit 人血紅氧合1 98%
iNOS(Human inducible nitric
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱(chēng)：Aurora A和Aurora B抑制劑(ZM447439)
英文名稱(chēng)：ZM-447439
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號(hào)：FS-X10826
產(chǎn)品介紹:
ZM447439是ATP競(jìng)爭(zhēng)性Aurora A和B選擇性抑制劑，IC50分別為110nM和130nM。 注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號(hào)：331771-20-1 純度：98.88% 分子量：513.59 儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
產(chǎn)短桿菌人凋亡相關(guān)因子配體Anti-OR5AU1 Antibody人α烯化(αENOL)
根瘤菌大鼠原激活肽Anti-OR5AU1 Antibody人α烯化(αENOL)
白布勒擔(dān)孢酵母大鼠補(bǔ)體因子HAnti-OR5B12 Antibody人膠原II(Collagenase II)
產(chǎn)氣腸桿菌人凋亡相關(guān)因子Anti-OR5B3 Antibody人膠原II(Collagenase II)
放射桿狀根瘤菌小鼠CD8分子Anti-OR5F1 Antibody人膠原I(Collagenase I)
果生鏈核盤(pán)菌人E選擇Anti-OR5H1 Antibody人膠原I(Collagenase I)
解淀粉芽孢桿菌植物亞種大鼠膀胱腫瘤抗原Anti-OR5D13 Antibody人磷化蛋白激C(P-PKC)
大腸桿菌小鼠CD25分子Anti-OR5D16 Antibody人磷化蛋白激C(P-PKC)
豬鏈球菌人嗜粒趨化蛋白Anti-OR5H15 Antibody人磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激(pERK)
假單胞菌小鼠CD20分子Anti-OR5H15 Antibody人磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激(pERK)
橡膠疫霉大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子BBAnti-OR5H6 Antibody人磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激(pERK)
地衣芽孢桿菌小鼠CD14分子Anti-OR5I1 Antibody人磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激(pERK)
克魯維尼爾巴克利酵母大鼠胃蛋白Anti-OR5K1 Antibody人乙酰酯(AChE)
非洲黑蛋巢人鼠嗜粒趨化因子Anti-OR5M1 Antibody人乙酰酯(AChE)
南類(lèi)芽孢桿菌小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子Anti-OR5L1 Antibody人葡萄糖氧化(GOD)
大腸埃希氏桿菌人內(nèi)分泌腺來(lái)源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子Anti-OR5M1 Antibody人葡萄糖氧化(GOD)
乳腺癌和卵巢癌易感基因RAD51C抗體豬屎豆根瘤菌人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞
染色體濃縮調(diào)控蛋白1抗體#姬菇人甲狀腺癌細(xì)胞ACT-1（干細(xì)胞庫(kù)保藏）
受體結(jié)合絲蘇激2抗體黃硬皮馬勃人低分化肺腺癌細(xì)胞
孤兒核受體抗體#桑葉刺盤(pán)孢人耐VP16絨癌細(xì)胞株
Aurora A和Aurora B抑制劑(ZM447439)黃紅菇 豬丹（疫苗）培養(yǎng)基磷脂
沙漠奇異球 豬丹培養(yǎng)基（不含吐溫）孕酮
柱彎孢 改良frey氏培養(yǎng)基睪酮
金針菇 B5培養(yǎng)基雌二
熱帶假絲酵母 N6培養(yǎng)基皮質(zhì)
鼠李糖乳桿 NLN培養(yǎng)基AKT蛋白
維羅納假單胞 white培養(yǎng)基DNA甲基轉(zhuǎn)移3A
蘭鏈霉 檢定培養(yǎng)基6號(hào)(05藥典)DNA甲基轉(zhuǎn)移3B
空腸彎曲桿 沙門(mén)氏屬診VI因子血清I型膠原蛋白
蒼黃擬無(wú)枝 霍亂弧O139診斷血清γ干擾
解脂亞羅酵母 O1群霍亂弧診斷血清白介1
殼 沙門(mén)氏屬診斷血清白介12
炭疽芽孢桿 美迪衣原體白介2
條紋炭角 硅烷化試劑白介6
大腸桿 改良馬丁液體（疫苗）培養(yǎng)基白介8
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
