TGFβR-I抑制劑(LY-364947)正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：BTA(Human Bladder tumor antigen) ELISA Kit 人膀胱腫瘤抗原對(duì)苯二 AR，97%
MK(Human Midkine) ELISA Kit 人中期因子對(duì)苯二
Bid(Human BH3 interacting domain death agonist) ELISA Kit 人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱(chēng)：TGFβR-I抑制劑(LY-364947)
英文名稱(chēng)：LY-364947
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號(hào)：FS-X10729
產(chǎn)品介紹:
LY-364947是一種有效的，ATP競(jìng)爭(zhēng)性的TGFβR-I抑制劑，IC50值為59nM，是對(duì)TGFβR-II選擇性的7倍。 注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號(hào)：396129-53-6 別名：HTS466284 純度：98.91% 分子量：272.3 儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
金頂側(cè)耳微白蛋白/細(xì)小清蛋白抗原Anti-DP-2 Antibody人神經(jīng)絲蛋白(NF)
炭疽芽孢桿菌酪酪肽多肽（1-36）Anti-DPP7 Antibody人神經(jīng)絲蛋白(NF)
淺灰白鏈霉菌Rad51抗原Anti-DPYSL2 Antibody人利尿肽(KP)
蠟狀芽孢桿菌Rap1A抗原Anti-DPYSL2 Antibody人利尿肽(KP)
淡青鏈霉菌維甲受體-β抗原Anti-DPPA4 Antibody人神經(jīng)降壓(NT)
大腸埃希氏菌Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗原Anti-DPYSL4 Antibody人神經(jīng)降壓(NT)
青藍(lán)馬杜拉放線(xiàn)菌抵抗抗原Anti-DPYSL4 Antibody人神經(jīng)激肽B(NKB)
毛霉屬G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原Anti-DQX1 Antibody人神經(jīng)激肽B(NKB)
RhoA抗原Anti-DRD4 Antibody人強(qiáng)啡肽(Dyn)
大腸埃希氏桿菌RhoC抗原Anti-DROSHA Antibody人強(qiáng)啡肽(Dyn)
皺紋單胞菌環(huán)指蛋白148抗原Anti-DRD1 Antibody人腦啡肽(ENK)
基利恩帚枝霉Rho相關(guān)蛋白激1抗原Anti-DROSHA Antibody人腦啡肽(ENK)
釀酒酵母Rho相關(guān)蛋白激2抗原Anti-DSG1 Antibody人γ肽(Pγ)
Bacillus methylotrophicus核受體RXRα抗原Anti-DUSP1 Antibody人γ肽(Pγ)
矩圓黑盤(pán)孢6-磷山梨脫氫抗原Anti-DTYMK Antibody人C型鈉尿肽(CNP)
小麥曲根霉S100B蛋白抗原Anti-DUS2 Antibody人C型鈉尿肽(CNP)
轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子MAZR抗體貝酵母人胃癌細(xì)胞（未分化）
淋巴細(xì)胞胞漿蛋白LCP1抗體白球擬酵母人食管鱗癌細(xì)胞
黑色瘤優(yōu)先表達(dá)抗原抗體沼澤紅假單胞菌小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞
磷脂C1樣蛋白抗體類(lèi)球紅細(xì)菌(球形紅桿菌)人胰腺腺泡上皮癌
TGFβR-I抑制劑(LY-364947)魯氏接合酵母 2--6-甲苯N末端C型利鈉肽前體
日本曲霉 基氧鎓四氟鹽總膽固
豬丹絲 酮基磷二甲酯低密度脂蛋白
大腸桿屬 5--1,10-菲咯啉高密度脂蛋白
聚生殼 1-苯基-2-炔-1-磷二酯4
球孢白僵 1,1,2-基-1H-苯并[e]磷二酯4
枯草芽孢桿 異丁葉酯磷二酯5
四川散斑殼 1-溴-4-n-丁基苯KI-67抗原
居真細(xì) 7-甲氧基-2-萘滿(mǎn)酮增殖核抗原
球孢白僵 2,3,4,6-四芐基-D-吡喃葡萄糖煙酰腺二核磷
枯草芽孢桿 1--9，10-二苯乙炔基蒽3-硝基酪
南假單胞 2-苯肼鹽鹽絲蟲(chóng)抗體
新疆鹽地桿 1,10-二溴癸烷ω干擾
凝結(jié)芽胞桿 三-O-乙酰-D-半乳糖烯ε干擾
印度洋斯塔普氏 三(2-氨基乙基)基質(zhì)衍生因子1
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
