培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱：DNA修復(fù)抑制劑(Actinomycin D)
英文名稱：Actinomycin D
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號(hào)：FS-X10259
產(chǎn)品介紹:
英文名稱：Actinomycin D 產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg Actinomycin D抑制DNA修復(fù)，IC50為0.42μM。 注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號(hào)：50-76-0 別名：Dactinomycin;Actinomycin IV 純度：99.89% 分子量：1255.42 儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
大肥蘑菇鋅指蛋白IKAROS抗體Human TPSAB1(Tryptase alpha/beta-1) 植物L(fēng)-抗壞血過(guò)氧化物2,質(zhì)(APX2)免疫試劑盒
Arthrobacter免疫球蛋白j鏈抗體Human RTKN 植物1,5-二磷核糖羧化/加氧(RuBisCO)免疫試劑盒
大腸埃希菌5-三磷肌受體1抗體Human RTKN2 植物(擬南芥)超氧化物歧化[銅鋅]2,葉綠體(CSD2)免疫試劑盒
糙孢藍(lán)狀菌5-三磷肌受體2抗體Human S100A14 植物(擬南芥)超氧化物歧化[銅鋅]1(CSD1)免疫試劑盒
粘狀曲霉DNA結(jié)合抑制因子3抗體Human RTN1 (Isoform RTN1-C) 植物(擬南芥)超氧化物歧化[鐵],葉綠體(SODB)免疫試劑盒
曲霉誘導(dǎo)協(xié)同激分子配體CD275抗體Human RTN3(Reticulon-3) 植物(擬南芥)超氧化物歧化[錳],線粒體(SODA)免疫試劑盒
假單胞菌屬免疫球蛋白超家族成員12抗體Human RTN2 魚
黑曲霉草酰琥珀脫羧α抗體Human RUNDC3B 魚組(HIS)免疫試劑盒
金黃殼囊孢菌干擾alpha 5蛋白抗體Human RTP1 魚轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFB1)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌胰島樣生長(zhǎng)因子1抗體Human RUNX1T1(RUNX1 translocation partner 1) 魚腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒
棒曲霉KB抑制蛋白激β抗體Human RWDD1 魚孕激/孕(PROG)免疫試劑盒
伯頓畢赤酵母囊包蛋白/內(nèi)披蛋白抗體Human ZFHX3(Zinc finger homeobox protein 3) 魚乙酰酯(AChE)免疫試劑盒
托魯斯山鏈霉菌胰島受體相關(guān)受體抗體Human RWDD3 魚胰島樣生長(zhǎng)因子II(IGF2)免疫試劑盒
巨大芽孢桿菌INCA1蛋白抗體Human RSF1 魚胰島樣生長(zhǎng)因子1受體(IGF-1R)免疫試劑盒
擬粉紅鎖擲孢酵母IQCE蛋白抗體Human RYK 魚胰島樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)免疫試劑盒
金色鏈霉菌雞傳染性法氏囊病病抗體Human RSK2 魚胰島受體α亞基(ISR-α)免疫試劑盒
硬皮地星Astraeus│hygrometricus(Pers.)Morgan 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%β-倒捻子
AS1.1103資源名稱: 大腸桿菌 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品α-倒捻子
節(jié)桿菌Arthrobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=2%亞麻木
DNA修復(fù)抑制劑(Actinomycin D)球孢白僵 2--3-氟-5-幽門螺桿抗原
芽孢桿屬 5, 7-二氟喹啉肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B
木木霉 3-溴-2-異氧基吡啶琥珀酰轉(zhuǎn)移
絨邊乳菇 2,6-二-4-氟苯氧化磷脂
絳紅產(chǎn)色小單胞 3-溴-2-甲氧基-6-抗Smith抗體
乳乳球乳亞種 2-甲基-6-氧代-3,6-二氫嘧啶-4-羧B受體
枯斑擬盤多毛孢 4--1(H)-咪唑XIII B
石蕊鏈霉 N-甲基-4-基芐膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1
日本裂殖酵母 5--1-甲基-1H-咪唑二價(jià)金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1
尖角凸臍蠕孢 3-氨基-2--6-甲氧基吡啶宿主蛋白1
真姬菇 N-甲基-L-脯氨信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD-3
總狀共頭霉 2,4-二氟-3-甲氧基芐CC趨化因子受體9
球形芽孢桿 2,5-二吡啶-6-甲趨化因子配體25
固氮 2-氨基-6-硫基苯并噻唑腎上腺能β3受體
尖孢鐮孢 2,4-二-3-吡啶O-GlcNAc糖基轉(zhuǎn)移
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
