培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:IAP抑制劑(LCL161)
英文名稱:LCL161
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10337
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:LCL161 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg LCL161是一種IAP抑制劑,在HEK293細胞中,抑制XIAP活性,IC50為35nM,在MDA-MB-231細胞中,抑制cIAP1活性,IC50為0.4nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1005342-46-0 純度:99.17% 分子量:500.63 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
層出鐮孢原變種黑色瘤相關(guān)抗原B1抗體Human MTHFD1 Ⅱ(FⅡ)
立枯絲核菌微小染色體維持缺陷蛋白5抗體Human MTHFD2(Methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2) 凝血原肽段1+2(F1+2)
榆黃蘑結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1抗體Human CDK5(Cyclin-dependent kinase 5) 凝血原前體蛋白(PIVKA-II)
深色殼囊孢基質(zhì)金屬蛋白-1抗體Human MTHFD1L 凝血原片段F1+2(F1+2)
蟬花磷化肌增強因子2C抗體Human MTHFS 凝血原(PT)
水生黃桿菌磷化肌增強因子2抗體Human MTHFD1L 凝血血栓調(diào)節(jié)蛋白復合物(T-TM)
皮生毛霉磷化髓鞘堿性蛋白抗體Human MTHFS 凝血受體(TR)
黑根霉磷化髓鞘堿性蛋白抗體Human MTHFD2(Methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2) 凝血敏感蛋白1(TSP-1)
芽殖球菌屬磷化肌球蛋白輕鏈6抗體Human OAS2(2′-5′-oligoadenylate synthase 2) 凝血抗凝血復合物(TAT)
孢小克銀漢霉輪生變種磷化p38MAPK抗體Human MRPL45 凝血(TM)
枯草芽胞桿菌磷化p38MAPK抗體Human NPPC(C-type natriuretic peptide) 凝血(Thrombin)
乳乳球菌葉蟬亞種磷化肌增強因子2C抗體Human TTR(Transthyretin) 凝溶膠蛋白(GS)
釀酒酵母磷化基末端激2抗體Human DSG1(Desmoglein-1) 凝溶膠蛋白(Gelsolin)
雜硅鹽礦物節(jié)桿菌蛋白激MPK38抗體Human MS4A6A 凝聚(CLU)
彎孢菌微粒體S轉(zhuǎn)移1抗體Human MPV17L 凝膠原蛋白(gelson)
枯草芽孢桿菌粘蛋白13抗體Human MPV17 尿腫瘤壞死因子相關(guān)誘導凋亡配體死亡受體4(TRAIL-DR4)
白地霉Geotrichum│candidum 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,美國進口膽
單核細胞增生李斯特菌Listeria│monocytogenes 質(zhì)量規(guī)格:>99%龍膽苦
豬鏈球菌Streptococcus│suis 質(zhì)量規(guī)格:0.99植
IAP抑制劑(LCL161)馬爾他布魯氏 3-氟鄰苯二甲酐反狀腺原
大腸埃希氏桿 乙泛
傘形卷霉 3,6-二氟鄰苯二甲泛C末端水解L1
大腸埃希 4-氟苯甲酰乙甲酯芳香族L-氨基脫羧
土壤德沃斯氏 2-溴苯乙肥大類胰蛋白
居真細 N,N′-二苯基-N,N′-(3-基)-1,1′-聯(lián)苯-4,4′-二肥胖抑制
Compostimonas 6-溴吡啶-2-頻哪酯肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A
大腸埃希氏桿 巰基七甘單甲肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B
諾卡氏 二溴二二乙酯肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C
矩圓黑盤孢 溴氟甲基膦二乙酯肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D
銅綠假單胞 1-烯基-3-甲基化咪唑分泌成分
淀粉產(chǎn)色鏈霉 1-乙基-3-甲基化咪唑鎓分泌型卷曲相關(guān)蛋白1
Bacillus aryabhattai 1,3-二溴-5-(易)分泌型球蛋白A
猴頭 1-乙基-3-甲基咪唑溴鹽封閉蛋白1
黃曲霉 1-丁基-3-甲基化咪唑鎓復制蛋白A
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)