DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑(Campathecin)正在熱銷的產(chǎn)品：AQP-2 (aquaporin Protein-2) 水通道蛋白-2（抗原）2-氟硫代苯酰 98%
ABCA1(ATP binding cassette transporter A1) 腺三結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗原4-氟苯異硫酯 98%
ABCG1 peptide 三腺結(jié)合盒亞家族G1抗原4－氟苯硫脲 99%
BACE( ASP
中文名稱：DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑(Campathecin)
英文名稱：Campathecin
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100mg|500mg
貨號(hào)：FS-X10476
產(chǎn)品介紹:
英文名稱：Campathecin 產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100mg|500mg Campathecin是一種有效的DNA酶topoisomerase I的抑制劑，在乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞中，IC50和IC70值分別為50nM和0.225μM。 注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號(hào)：7689-03-4 別名：(S)-(+)-Camptothecin;CPT 純度：98.26% 分子量：348.35 儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
Corynebacterium urealyticum RAS蛋白樣激活劑1抗體Anti-EIF4A1 Antibody異染色質(zhì)蛋白1(HP1)
中慢生華癸根瘤菌Ras相關(guān)結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)2抗體Anti-ELANE Antibody異檸檬脫氫2(IDH2)
殺鮭氣單胞菌抑癌基因PDLIM4抗體Anti-EIF4A2 Antibody(PB0807)異檸檬脫氫1(IDH1)
糙孢籃狀菌RAS抑制蛋白1抗體Anti-EIF4G1 Antibody異連蛋白β(DTNβ)
彎孢周期D相關(guān)蛋白抗體Anti-EIF6 Antibody(PB0611)異連蛋白α(DTNα)
谷棒桿菌Rho家族GTP3抗體Anti-ELAVL2 Antibody乙酰乙酰合成(AACS)
佛羅里達(dá)側(cè)耳環(huán)指蛋白139抗體Anti-ELP3 Antibody乙酰復(fù)合-O-甲基轉(zhuǎn)移(ASMT)
葡萄座腔菌Rho GTP激活蛋白29抗體Anti-ELAVL4 Antibody乙酰乙酰轉(zhuǎn)移2(ACAT2)
假單胞菌食道癌抑制生長(zhǎng)蛋白抗體Anti-ELF3 Antibody乙酰(A-CoA)
黑曲霉RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體Anti-ELF1 Antibody乙酰酯關(guān)聯(lián)蛋白(ACHAP)
波蘭青霉雄激受體相關(guān)蛋白24抗體Anti-EMD Antibody乙氧化1(AOX1)
猴頭菌癌基因RAS相關(guān)蛋白R(shí)ab25抗體Anti-EML4 Antibody乙基二腦病變基因1(ETHE1)
蘇云金芽胞桿菌核受體RXRβ抗體Anti-EME1 Antibody乙二Ⅰ(GLO1)
大腸埃希氏菌維甲受體γ抗體Anti-ENG Antibody乙脫氫7(ADH7)
蠟狀芽孢桿菌磷化Rho相關(guān)蛋白激1抗體Anti-ENG Antibody乙脫氫6(ADH6)
母雞乳桿菌視網(wǎng)膜母瘤結(jié)合蛋白P48抗體Anti-ENG Antibody乙脫氫5(ADH5)
長(zhǎng)柄木霉Trichoderma│longbrachiatum 質(zhì)量規(guī)格：0.98
塔賓曲霉Aspergillus│tubingensis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
鐮孢Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：0.98
DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑(Campathecin)鏈霉屬 3,5,7,8-四氫-2-甲基-4H-硫代吡喃并[4,3-D]嘧啶-4-酮四旋蛋白2
雪白根霉 5-氨基-2-溴轉(zhuǎn)錄激活因子6
枯草芽孢桿 11-溴十一X框結(jié)合蛋白
微小根毛霉 2-溴-9,9-二甲基芴蛋白二硫鍵異構(gòu)
香菇 (3S)-3-(芴甲氧羰基氨基)-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊單氧化
枯草芽孢桿 5-羥基-1-四氫萘酮苯乙N甲基轉(zhuǎn)移
枯草芽孢桿 2,6-二甲基-4H-4-亞吡喃基二β-己糖
大腸埃希 間溴苯乙巨病PP65抗原
塞納加爾彎孢 1,3-雙(2,6-二異苯基)-4,5-二氫咪唑四氟鹽磷肌3激
白球擬酵母 2，6-二異基苯異酯游離皮質(zhì)酮
產(chǎn)紫晶鏈孢囊福井亞種 2,6-二氟II型膠原
炭疽芽胞桿 L-脯叔丁基酯α-突觸核蛋白
短小芽孢桿 羥基乙叉二膦（HEDP）硫乙酰肝蛋白多糖
裂蹄層孔（可提供） 乙二興奮性神經(jīng)遞質(zhì)
貝倫格葡萄座腔梨生?；?/span> 2,6-雙(2-苯并咪唑基)吡啶尿
