中文名稱:鈣黃綠素AM
英文名稱:Calcein,AM
產品規(guī)格:10μg
貨號:FS-X9823
產品介紹:
鈣黃綠素AM,是一種應用廣泛的綠色熒光細胞標記物。鈣黃綠素AM具有膜透性,共孵育時可以傳過細胞,其本身不具有熒光信號,但在胞內被酯酶水解后,生成具有熒光信號的鈣黃綠素。 在健康的活細胞細胞質中,鈣黃綠素可以保持高負電荷狀態(tài)。由于其對細胞的毒性小,鈣黃綠素AM 已經被廣泛用于研究細胞膜的完整性和長期示蹤觀察以及活細胞計數。 :148504-34-1 分子式:C46H46N2O23 分子量:994.86 儲存:-20℃,避光,有效期12個月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
D-二聚體(D2D)英文名:D2D 原癌蛋白CBL2抗體包裝5g
D-多巴色變位(DDT)英文名:DDT 信號調節(jié)蛋白α抗體包裝1g
DNA修復蛋白RAD50(RAD50)英文名:RAD50 信號淋巴活化分子CD150抗體包裝5g
DNA損傷誘導轉錄因子3(DDIT3)英文名:DDIT3 巨噬炎性蛋白16抗體包裝10g
DNAⅠ樣蛋白3(DNASE1L3)英文名:DNASE1L3 果蠅CG6856-PA抗體包裝5g
DNA基轉移3B(DNMT3B)英文名:DNMT3B 色c氧化COX7A2抗體包裝1g
DNA基轉移1(DNMT1)英文名:DNMT1 剪切和多聚腺化特異性因子4抗體包裝25g
DNA激活蛋白激催化亞基肽(PRKDC)英文名:PRKDC 組織蛋白E抗體包裝5g
Discs大同源物4(DLG4)英文名:DLG4 緊密連接蛋白5抗體包裝25g
Discoidin域受體家族成員1(DDR1)英文名:DDR1 分化周期CDC42相互作用蛋白4抗體包裝5g
Dickkopf相關蛋白4(DKK4)英文名:DKK4 周期蛋白依賴性激樣3抗體包裝100ml
Dickkopf相關蛋白1(DKK1)英文名:DKK1 殺菌肽/天蠶抗菌肽單克抗體包裝25ml
C組著色性干皮病偶聯(lián)因子(XPC)英文名:XPC 第十七號染色體開放閱讀框87抗體包裝1g
C-型鈉尿肽(CNP)英文名:CNP 降鈣受體抗體包裝25g
C-肽(C-Peptide)英文名:C-Peptide 補體C2a鏈多肽抗體包裝5g
蠟樣芽孢桿菌Bacillus│cereus 質量規(guī)格:purity>97%,BR乙型肝炎病e抗原試劑盒野鷲尾;Lridin
: ivcas7.00265資源名稱: 球形賴芽孢桿菌 質量規(guī)格:>98%,單醋鹽乙型肝炎病e抗體試劑盒芫花;Genkwanin
百日咳博德特氏菌Bordetella│pertussis 質量規(guī)格:>99.0%,BR乙型肝炎表面抗原試劑盒3-乙?;橄?;alpha-bosw
鈣黃綠素AM樟疫霉 4--3,5-二氟載脂蛋白A5
擬康寧木霉 3-溴-6,9-二苯基-9H-咔唑煙酰
擬青霉 3-氨基-N-CBZ-吡咯烷鹽鹽結核桿IgM抗體
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 Cbz-1-氨基-1-環(huán)基線粒體呼吸鏈復合物I
蓋氏海桿狀 5-溴乙?;?2-羥基苯甲N-甲基-D-天門冬(NMDA)受體A1亞單位NR4
帚狀曲霉 7-基啉15脂加氧1
大腸埃希 2-氨基-3-氟苯藍氏賈第鞭毛蟲
粘孢白僵 DL-脯氨酰鹽鹽β-乳球蛋白
黃曲霉 [1,3-雙(2,4,6-三基)-2-咪唑烷亞基][(苯硫基)亞甲基](三環(huán)己基膦)二化釕酪蛋白
棒形青霉 N,N-雙叔丁氧羰基-N-烯血吸蟲
枯草芽孢桿 2-異基-4,5-二甲基-1H-咪唑藍氏賈第蟲
地衣芽胞桿 1-Boc-4-溴-1H-吡唑痢疾阿米巴
三線鐮孢 Boc-D-2,4-二苯包蟲病
爪哇根霉 磺達肝癸鈉隱孢子蟲
巨大芽孢桿 A 7-溴-1,2,3,4-四氫喹啉鹽絲蟲