中文名稱:死細(xì)胞核染料(碘化丙啶)
英文名稱:PI
產(chǎn)品規(guī)格:20mg|5mg|10mg
貨號(hào):FS-X9820
產(chǎn)品介紹:
碘化丙啶與DNA 結(jié)合,它不具備序列選擇性,每4~5 個(gè)堿基對(duì)進(jìn)行插入。PI 也可以與RNA 結(jié)合,因此在RNA 核酸治療中,需要區(qū)別PI 是與DNA 還是RNA 結(jié)合,但PI 一旦與核酸結(jié)合,其熒光增強(qiáng)20~30 倍,熒光激發(fā)向紅色大光位移大約30~40nm,熒光發(fā)射向藍(lán)光大位移大約15nm。雖然其摩爾吸光系數(shù)比較低,但是PI 具有一個(gè)足夠打的斯托克斯位移(stokes shift),可以通過(guò)合適的光學(xué)濾光器來(lái)檢測(cè)到其標(biāo)記的核DNA 或者標(biāo)記結(jié)合的抗體。PI 適用于熒光顯微鏡、激光共聚焦掃描顯微鏡、流式細(xì)胞儀以及熒光光度法。 PI 不具備膜滲透性,通常用于多色熒光技術(shù)中區(qū)分死細(xì)胞群體。PI 的復(fù)染操作,可以涉及到多種實(shí)驗(yàn)應(yīng)用,如細(xì)胞學(xué)標(biāo)記技術(shù)、直接或間接地抗體熒光檢測(cè)、mRNA 表達(dá)原位雜交以及特定的細(xì)胞結(jié)構(gòu)熒光試劑染色。 儲(chǔ)存:-20℃,避光,有效期12個(gè)月。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
RAS癌基因家族成員RAB5A(RAB5A)英文名:RAB5A 白介1-β轉(zhuǎn)化樣凋亡蛋白6抗體包裝500g
P-選擇糖蛋白配體1(PSGL1)英文名:PSGL1 白介1-β轉(zhuǎn)化樣凋亡蛋白6抗體包裝5g
P選擇(SELP)英文名:SELP 表面趨化因子受體4抗體包裝5MG
Podocan蛋白(PODN)英文名:PODN CD19抗體包裝1g
PHD指蛋白8(PHF8)英文名:PHF8 環(huán)氧合2/前列腺內(nèi)過(guò)氧化物合成2抗體包裝250mg
Persephin蛋白(PSPN)英文名:PSPN 白分化抗原CD2AP抗體包裝25g
Osterix蛋白(OSX)英文名:OSX CD3/CD3-ε 抗體包裝5g
N-乙酰轉(zhuǎn)移1(NAT1)英文名:NAT1 軟骨糖蛋白39抗體包裝25g
N-乙酰半乳糖胺α(NAGα)英文名:NAGα 癌胚抗原抗體包裝5g
N-乙酰β-D-基葡萄糖(NAGase)英文名:NAGase 癌胚抗原相關(guān)粘附分子8抗體包裝1g
N-型電壓依賴鈣離子通道α1B亞基(CACNα1B)英文名:CACNα1B C型鈉尿肽抗體包裝5g
N-基-D-天氡離子能谷受體2A(GRIN2A)英文名:GRIN2A 組織蛋白K抗體包裝1g
Nodal同源物(NODAL)英文名:NODAL 組織蛋白D抗體包裝5g
NADH脫氫1(ND1)英文名:ND1 組織蛋白H抗體包裝25g
Misato同源物1(MSTO1)英文名:MSTO1 磷化鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2α抗體包裝5g
需鹽桿菌Salegentibacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)異腎上腺試劑盒葉綠;Phytol
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品乙型肝炎病前S2抗原試劑盒異虎耳草 ;Isopimpinelli
廈門海旋菌Thalassospira│xiamenensis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)乙型肝炎病前S2抗體試劑盒一枝蒿 ;Bullatine A
死細(xì)胞核染料(碘化丙啶)弗雷德里克斯堡假單胞 4-羧基-3-氟苯甘脫氫
枯草芽胞桿 氮化鈣 (metals basis)神經(jīng)降壓
芽胞桿 鋁鑭盤, 10x10x1mm, polished one side, 100 orientatio寡樹(shù)突膠質(zhì)糖蛋白抗體
穴形節(jié)皮 十二三鈦鋁超廣譜β-內(nèi)酰
植物乳桿 2,2-二氟-1,3-苯并二惡茂-4-甲三葉因子1
盤孢屬 N-苯磺酰N-羥乙酰神經(jīng)
冠突曲霉 3,4-二氫異喹啉-1(2H)-酮布魯氏桿
沙生梭孢殼 5-甲?;笠呖乖?/span>
葡萄汁有孢漢遜酵母 DL-N-Boc-烯基甘神經(jīng)降壓前體
牛舌、肝色牛排 2,6-二氟苯肼13(S)-HODE
白地霉 4-苯基乙炔基鄰苯二甲酐髓鞘少突膠質(zhì)糖蛋白
谷棒桿 (3R,4R)-3,4-二甲基-4-(3-羥基苯基)半胱蛋白12
黃桿 [1,3-二氫-1,3-雙(2,4,6-三基)-2H-咪唑-2-亞基](2-噻吩基亞甲基)(三NLRP3炎癥小體
腸炎沙門氏 (S)-2-氨甲基-1-Cbz-吡咯烷解脲支原體IgM抗體
栗疫 5-溴-3-吡啶-2-羧Traf2結(jié)合蛋白