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產品介紹:
英文名稱：ALW-II-41-27 產品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg ALW-II-41-27是一種新穎的Eph receptor抑制劑，用于癌癥研究。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號：1186206-79-0 別名：Eph receptor tyrosine kinase inhibitor 純度：99.59% 分子量：607.69 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
中文名稱：Eph receptor抑制劑(ALW-II-41-27)
英文名稱：ALW-II-41-27
產品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號：FS-X10367
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
細枝孢磷化中心粒蛋白Nudel抗體Human P3(Caspase-3) 晶體蛋白β(Cryβ)
嗜中溫寒冷桿菌類固脫氫樣蛋白NSDHL抗體Human CYCS(Cytochrome c) 晶體蛋白α(Cryα)
弓形蟲(NT株)磷化核因子p50/k基因結合核因子抗體Human APOA1(Apolipoprotein A-I) 緊密連接蛋白1(ZO1)
運動節(jié)桿菌磷化1型神經纖維瘤抗體Human NOS1/nNOS(Nitric oxide synthase, brain) 金屬肽含血小板反應蛋白1(ADAMTS1)
短短芽孢桿菌磷化谷受體2B抗體Human APOC1(Apolipoprotein C-I) 金屬硫蛋白2(MT-2)
根瘤菌磷化核因子p50/k基因結合核因子抗體Human PDGFB(Plaet-derived growth factor subunit B) 金屬硫蛋白2(MT2)
漢遜德巴利酵母磷化核因子p50/k基因結合核因子抗體Human APCS(Serum amyloid P-component) 金屬硫蛋白(MT)
根瘤菌磷化核因子p50/k基因結合核因子抗體Human P1(Caspase-1) 金葡菌腸(SE)
銀灰口蘑磷化核因子p50/k基因結合核因子抗體Human CDH5(Cadherin-5) 解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)
亮白曲霉磷化IKB α抗體Human IFNW1(Interferon omega-1) 解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)
磷化IKB alpha抗體Human DLK-1(Protein delta homolog 1) 解整合樣金屬蛋白33(ADAM33)
毛頭鬼傘（雞腿菇）磷化核因子活化T胞漿蛋白2抗體Human SOST(Sclerostin) 解整合樣金屬蛋白19(ADAM19)
枯草芽孢桿菌還原型輔Ⅱ氧化5/煙酰腺二核磷抗體Human PYY(Peptide YY) 解整合樣金屬蛋白15(ADAM15)
楊葉點霉增殖相關蛋白NANOS2抗體Human ANGPTL3(Angiopoietin-related protein 3) 解整合樣金屬蛋白12(ADAM12)
枯草芽孢桿菌核因子/k基因結合核因子 p52/p100抗體Human ACO1(Aconitase 1) 解整合樣金屬蛋白10(ADAM10)
露濕漆斑菌磷化核因子/k基因結合核因子p100抗體Human AOC3(Membrane primary amine oxidase) 解脲脲原體抗體(UU-Ab)
南方鹽單胞菌Halomonas│meridiana 質量規(guī)格：1500USP u/mg,豬源絡塞維
出芽短梗霉=出芽茁霉(黑酵母)Aspergillus│pullulans 質量規(guī)格：95%,美國進口原裝絡塞琳
粘質沙雷菌Serratia│marcescens 質量規(guī)格：>45 U/mg,進分紅景天
Eph receptor抑制劑(ALW-II-41-27)休哈塔假絲酵母 3，4－二氟苯硫糖化血紅蛋白
安絡小皮傘* 4-羥基-2-甲基喹啉糖化血紅蛋白A1c
大腸埃希 2-硝基芴糖化血清蛋白
假單胞屬 仲丁基溴化鎂糖皮質類固受體
少根根霉 8-硝基喹啉糖缺失性轉鐵蛋白
大腸埃希氏桿 5-硝基喹啉糖原合成
枯草芽孢桿 2--4-氟苯糖原合成激3
*灰葡萄孢 乙基二苯基膦糖原合成激3β
栗褐芽孢桿 2-溴-4-苯甲天門冬
蘋果鏈格孢 2，6-二硝基苯天門冬氨基轉移；谷草轉氨
枯草芽孢桿 2-氨基-3-甲甜菜堿高半胱甲基轉移
黑曲霉 N-Boc-5-溴-2-鐵調
葡萄座腔 9-乙?；?3,6-二咔唑同型半胱
擬黑馬朗假絲酵母 Pamabrom銅藍蛋白
Bacillus aryabhattai 2,3-二甲氧基-5-甲基-1,透明質
