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英文名稱：PD 169316
產品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg
貨號：FS-X10771
產品介紹:
PD169316是一種高效，細胞透過的，有選擇性的p38MAP kinase抑制劑，IC50值為89nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號：152121-53-4 純度：97.69% 分子量：360.34 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
泡盛曲霉熒光Cy3標記小鼠IgG(流式同型對照)Anti-IL37 Antibody人S100鈣結合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)
大腸埃希氏菌熒光Cy3標記羊IgG(流式同型對照)Anti-IL6 Antibody人S100鈣結合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)
玫瑰菌核鏈霉菌熒光Cy3標記大鼠IgG(流式同型對照)Anti-ILF3 Antibody人S100鈣結合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)
墳墓節(jié)桿菌熒光Cy3標記牛IgGAnti-IL9R Antibody人S100鈣結合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)
假絲酵母屬熒光Cy3標記牛IgMAnti-INA1 Antibody人前病整合位點1(Pim1)
戴爾根霉熒光Cy3標記雞IgGAnti-IL6 Antibody人前病整合位點1(Pim1)
花土溝游動微菌熒光Cy3標記雞IgMAnti-ILKAP Antibody人綠膿桿菌外A(PEA)
弗雷德里克斯堡假單胞菌熒光Cy3標記狗IgGAnti-ING1 Antibody人綠膿桿菌外A(PEA)
沃特曼籃狀菌熒光Cy3標記羊IgMAnti-ING4 Antibody人流感病A(FLU A)
半園田頭菇熒光Cy3標記豚鼠IgGAnti-ING3 Antibody人流感病A(FLU A)
彩色豆馬勃熒光Cy3標記豚鼠IgMAnti-ING4 Antibody人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)
根瘤菌熒光Cy3標記馬IgGAnti-ING5 Antibody人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)
大腸埃希氏菌熒光Cy3標記馬IgMAnti-INHBA Antibody人抗乙型肝炎病核心抗體(HBcAb)
污水土地桿菌熒光Cy3標記人IgGAnti-INHBB Antibody人抗乙型肝炎病核心抗體(HBcAb)
多主葡萄殼菌熒光Cy3標記人IgMAnti-INHBE Antibody人抗乙型肝炎病核心IgM抗體(HBcAb-IgM)
黑木耳熒光Cy3標記人IgAAnti-INHBC Antibody人抗乙型肝炎病核心IgM抗體(HBcAb-IgM)
Ras樣蛋白B抗體謝瓦曲霉人肺微血管內皮細胞
視網膜母細胞瘤結合蛋白5抗體鹿皮色曲霉小鼠骨樣細胞
原癌基因相關蛋白RAP2B抗體炭黑曲霉人脂肪間充質干細胞
環(huán)指蛋白6抗體泡盛曲霉煙色變種人套細胞淋巴瘤
p38MAP激酶抑制劑(PD 169316)Brevibacillus parabrevis 5-氨基-1-戊表皮生長因子
克魯斯假絲酵母 聚(9-乙烯咔唑)氨基轉移
紅托竹蓀 5-溴-2-甲氧基苯甲二
硬結節(jié)桿 原丁三乙酯補體成分5
伯克霍爾德氏 烯基磺鈉補體蛋白3
鮮綠青霉 甲基烯芐基酯補體蛋白4
丁梭 L-蛋甲酯鹽鹽補體片斷3a
釀酒酵母 1-環(huán)已基-2-嗎啉乙基碳二亞對甲苯磺鹽不對稱二甲基精
香菇 氧硅烷層粘連蛋白
鐮刀屬 4-氨基-3-甲超敏C反應蛋白
枯草芽孢桿 三超氧化物歧化
粘孢白僵 1,3-二(4-氨苯氧基)苯成纖維生長因子
雞白痢雞傷寒多價染色平板凝集抗原參照品 紅煌綠瓊脂成纖維生長因子23
比基尼鏈霉 YPD液體培養(yǎng)基雌二
黃色桿屬 檢定培養(yǎng)基1號（低PH）促甲狀腺
