TGF-βRI抑制劑(ALK5抑制劑)(SD-208)正在熱銷的產(chǎn)品：HAMA(Human antimous antibody) ELISA 人抗鼠抗體 分子生物學(xué), ≥99.8%
VGCC(Human voltage-gated calcium channel) ELISA Kit 人鈣離子通道抗體 GR，99.8%
BrdU(Human Bromodeoxyuridine) ELISA K
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱：TGF-βRI抑制劑(ALK5抑制劑)(SD-208)
英文名稱：SD-208
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg
貨號(hào)：FS-X10851
產(chǎn)品介紹:
SD-208是一種選擇性的TGF-βRI(ALK5)抑制劑，IC50值為48nM，對(duì)其選擇性是對(duì)TGF-βRII的10倍。 注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號(hào)：627536-09-8 純度：98.33% 分子量：352.75 儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
雕刻擬盤多毛孢大鼠Ⅷ相關(guān)抗原Anti-POLA1 Antibody人血管舒緩激肽(BK)
奇異球菌屬大鼠IXAnti-Pogz Antibody人血管舒緩激肽(BK)
海水甲基桿菌小鼠碳酐Anti-POLB Antibody人肌球蛋白輕鏈(MLC)
高盧蜜環(huán)菌人P53Anti-POLB Antibody人肌球蛋白輕鏈(MLC)
千葉鏈霉菌人周期D3Anti-POLD1 Antibody人α-輔肌動(dòng)蛋白3(ACTN-3)
釀酒酵母大鼠ⅩAnti-POLD3 Antibody人α-輔肌動(dòng)蛋白3(ACTN-3)
郝氏鏈霉菌小鼠降鈣基因相關(guān)肽Anti-POLD3 Antibody人超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)
香菇8人周期D2Anti-POLDIP3 Antibody人超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)
松杉靈芝小鼠胃動(dòng)Anti-POLE Antibody人肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
苜蓿中華根瘤菌大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子Anti-POLE Antibody人肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
芹側(cè)耳大鼠纖溶抗纖溶復(fù)合物Anti-POLG2 Antibody人血清淀粉樣蛋白A(SAA)
假堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌小鼠生長(zhǎng)抑Anti-POLE4 Antibody人血清淀粉樣蛋白A(SAA)
鏈霉菌人周期D1Anti-POLK Antibody人熱休克蛋白60(Hsp-60)
釀酒酵母人內(nèi)皮抑Anti-POLI Antibody人熱休克蛋白60(Hsp-60)
紅蠟盤菌小鼠血纖蛋白原Anti-POLR1B Antibody人熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)
芽孢桿菌大鼠凝血抗凝血復(fù)合物Anti-POLQ Antibody人熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)
轉(zhuǎn)化性卷曲含蛋白質(zhì)2地錘菌屬人青光眼小梁網(wǎng)細(xì)胞
微管相關(guān)同源蛋白TPX2抗體茄腐皮鐮刀菌大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞
腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白5褐赤刺革菌人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白2TNFα-IP2抗體肉座菌屬人皮膚鱗癌細(xì)胞
TGF-βRI抑制劑(ALK5抑制劑)(SD-208)硬結(jié)節(jié)桿 RaKa-Ray培養(yǎng)基葡萄糖依賴性胰島釋放多肽
蛇孢霉屬 3-氨基-4-基吡唑葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2
發(fā)酵畢赤酵母 HC瓊脂基礎(chǔ)前列環(huán)
冬蟲夏草 改良LETHEEN瓊脂基礎(chǔ)前列腺E2
*林肯鏈霉 [2-[2-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙羥甲基戊二單酰
金黃色葡萄球金黃亞種 TAT肉湯熱休克蛋白20
檸檬色游動(dòng)球 YNB培養(yǎng)基熱休克蛋白70
葉點(diǎn)霉屬 去氧膽鹽枸櫞鹽瓊脂乳鐵蛋白
乳桿屬 3,4,7,8-四甲基-1,-菲羅啉狀腺原
柔嫩艾美耳球蟲 葡萄球選擇性瓊脂1三葉因子3
羅丹塞伯林德納氏酵母 甘露卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ)色上皮衍生因子
粉紅寄生 改良Giolitti-Cantobi肉湯腎上腺
香菇 (R)-(+)-碳烯酯生長(zhǎng)分化因子9
雙氮纖維單胞 TMP瓊脂培養(yǎng)基生長(zhǎng)
變天藍(lán)鏈霉 EF-18瓊脂生長(zhǎng)釋放肽
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
